|
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ 6.1. Изучение влияния специфических иммуноглобулинов1на ферментативную активность СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КОг Имеющиеся в настоящий момент данные литературы об изменении активности различных ферментов при взаимодействии со специфическими антителами противоречивы [12, 46, 118, 293]. Поэтому рассмотрение вопросов, связанных с изучением изменения ферментативной активности энзимов AOG и ПМ при взаимодействии со специфическими иммуноглобулинами представляло определенный интерес и было целесообразно в контексте данной работы. Источником специфических иммуноглобулинов служили сыворотки боль* ных РА с заранее определенными высокими титрами антител к СОД (экстинкция >0,14 Ед), ГР; ЦП, КАТ, АДА (экстинкция;> 0,17 Ед), 5'-НТ, ПНФ, ГДА (экстинкция > 0,16 Ед), КО (экстинкция > 0,19 Ед). "Чистые" антитела к ферментам получали с помощью соответствующего антигенного иммуносорбента [24], с которым была проведена инкубация сывороток больных при 37°С на магнитной мешалке в течение 1 часа, а затем диссоциация1комплекса антиген-антитело с помощью 0,1М глицин-HCl буфера (рН=2,5). После соответствующего диализа против ЗФР и последующего концентрирования через полупроницаемую мембрану системы "Sartorius" до первоначального объема сыворотки, антитела к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО использовались в эксперименте по изучению их взаимодействия с соответствующим + ферментом: была проведена инкубация антигенного иммуносорбента и растворимой формы фермента с полученными, антителами в течение 1 часа при 37°С на магнитной мешалке. Затем определена ферментативная активность. В‘качестве контроля применяли растворы СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5-НТ, ПНФ, ГДА и КО i физиологическом растворе (п=30, для каждого фермента) и сыворотки практиче ски здоровых людей (п=30). |
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМЫХ СОРБЕНТОВ 5.1. Изучение влияния специфических иммуноглобулинов на ферментативную активность 5'-нуклеотидазы, пуриннуклеозидфосфорилазы и гуаниндезаминазы Имеющиеся в настоящий момент литературные данные об изменении активности различных ферментов при взаимодействии со специфическими' антителами противоречивы [9, 23, 57, 170]. Поэтому рассмотрение вопросов, связанных с изучением изменения ферментативной активности изучаемых энзимов при взаимодействии со специфическими иммуноглобулинами представляло определенный интерес и было оправдано в контексте данной работы. Источником специфических иммуноглобулинов служили сыворотки больных РА с заранее определенными высокими титрами антител (экстинкция > 0,16 е.о.п.) к 5'-НТ, ПНФ и ГДА. "Чистые" антитела к ферментам получали с помощью соответствующего антигенного иммуносорбента [12], с которым была проведена инкубация сывороток больных при 37°С на магнитной мешалке в Щ течение 1 часа, а затем диссоциация комплекса антиген-антитело с помощью 0,1М глицин-HCl буфера, рН=2,5. После соответствующего диализа против ЗФР и последующего концентрирования через полупроницаемую мембрану системы "Sartorius" до первоначального объема сыворотки, антитела к 5'-НТ, ПНФ и ГДА использовались в эксперименте по изучению их взаимодействия с соответствующим ферментом: была проведена инкубация антигенного иммуносорбента и растворимой формы фермента с полученными антителами в течение 1часа при 37°С на магнитной мешалке. Затем определена активность 5'-НТ, ПНФ и ГДА. В качестве контроля применяли растворы 5'-НТ, ПНФ и ГДА в физиологическом растворе (п=30, для каждого фермента) и сыворотки практически здоровых людей (п=30). |