После взаимодействия каждого фермента с соответствующими чистыми антителами было выявлено снижение ферментативной активности СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5-НТ, ПНФ, ГДАразличной степени выраженности (см. таблицу 18). Следует отметить, что изменение ферментативной активности изучаемых энзимов было различным при использовании растворимой и иммобилизированной форм ферментов. Так, например, активность растворимой формы 5'-НТ после взаимодействия со специфическими («чистыми») Ат снизилась менее чем на 40%; различия с контрольной группой (физиологический раствор) и донорами достоверны (р=0,008 и р=0,046, соответственно). Уменьшение активности иммобилизированной формы*5-НТ по сравнению с исходными значениями произошло почти в 2 раза; выявлены статистически достоверные различия с физиологическим раствором (р=0,0007) и донорами (р=0,0077) (см. таблицу 18). Сходная картина наблюдалась и при изучении влияния специфических Ат на активность*растворимой и иммобилизированной форм СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА и ПНФ (см. таблицу 18). Ферментативная активность иммобилизированной ГДА практически полностью ингибировалась специфическими антителами (р<0 ,0 0 0 1 ), в отличие от растворимой формы фермента, при использовании которой хотя и наблюдалось снижение активности, но не столь существенное (р<0 ,0 0 1 2 ). Совершенно другая картина наблюдалась при изучении влияния специфических иммуноглобулинов на активность КО; Так активность растворимой формы КО после взаимодействия со специфическими («чистыми») Ат увеличилась незначительно (р=0,151); различия с контрольной группой (физиологический раствор) и донорами статистически не достоверны (р=0,067 и р=0,071, соответственно). Увеличение активности иммобилизированной формы КО по сравнению с исходными значениями произошло в среднем на 25-30% (р=0,047); выявлены статистически достоверные различия с физиологическим раствором (р=0,044) и донорами (р=0,024) (см. таблицу 18). Включение фермента в пространственную решетку полиакриламидного геля, составляющего основу ИГАП, (иммобилизированная форма) придает антигену |
После взаимодействия каждого фермента с соответствующими чистымий антителами было выявлено снижение ферментативной активности 5'-НТ, ПНФ и ГДА различной степени выраженности (см. табл. 10). Таблица 10. Сравнительная характеристика активности растворимой и иммобилизированной форм 5'-НТ, ПНФ и ГДА после взаимодействия с антителами Фермент Форма фермента Исходная активность фермента Активность фермента после взаимодействия с физиол. раствором (п=30) с сывороткой доноров (п=30) с чистыми антителами (п=30) 5-НТ (Ед/л) Растворимая 41,85 ±5,44 42,64 ±5,61 35,58 ±4,12 26,96 ±3,18 Иммобилизированная 38;69 ±4,12 39,26 ± 4,89 30,62 ±3,04 19;22 ±2,79 ПНФ(мкмогаУл/мин) Растворимая 22,14 ±2,71 21,49 ±2,93 18,56 ±2,66 12,82 ± 2,78 Иммобилизированная 20,99 ± 2,82 20,68 ±3,12’ 16,44 ±2,11 10,38 ±2,07 ГДА (МЕ/л) Растворимая• 28,17 ±3,46 27,51 ±3,94 16,52 ±2,46’ 12,62 ± 1,02 Иммобилизированная 27,55 ±3,67 27,68 ± 4,01 10,38 ± 1,86 2,28 ±0,17 Следует отметить, что изменение ферментативной активности изучаемых энзимов было различным при использовании растворимой и иммобилизированной форм ферментов. Так, например, активность растворимой формы 5’-НТ после взаимодействия со специфическими («чистыми») Ат снизилась менее, чем на 40%; различия с контрольной группой (физиологический раствор) и донорами достоверны (р=0,008 и р=0,046, соответственно). Уменьшение активности иммобилизированной формы 5'-НТ по сравнению с исходными значениями произошло почти в 2 раза; выявлены статистически достоверные различия с физиологическим раствором (р=0,0007) и донорами (р=0,0077) (см. табл. 10). Сходная картина наблюдалась и при изучении влияния*специфических Ат * на активность растворимой (достоверные различия с физ. раствором, р=0,036 и недостоверные с донорами, р=0,141) и иммобилизированной форм ПНФ (достоверные различия с физ. раствором, р=0,007 и донорами, р=0,045). Ферментативная активность иммобиллизированной ГДА практически полностью ингибировалась специфическими антителами (р<0,0001), в отличие от растворимой формы фермента, при использовании которой хотя и наблюдалось снижение активности, но не столь существенное (р<0,0012). Включение фермента в пространственную решетку полиакриламидного геля (иммобилизированная форма) придает антигену (5'-НТ, ПНФ, ГДА) новые свойства, благодаря которым он приобретает определенные преимущества перед растворимой формой. Такой метод приводит к возникновению незначительных конформационных изменений, сохраняющих активность фермента, но, в то же время, способствующих, например, экспрессии гидрофобных участков молекулы энзима, содержащих «скрытые эпитопы». Ат к 5-НТ А т к ПНФ А т к ГДА □ До сорбции Ш П осле сорбции Рисунок 8. Содержание антител к 5'-НТ, ПНФ, ГДА в сыворотке крови больных РА после взаимодействия со специфическим магнитоуправляемым сорбентом. Параллельно в иммуноферментном методе были исследованы сыворотки крови больных РА (п=30 для каждой серии опытов) на наличие антител к 5'-НТ, ПНФ, ГДА после взаимодействия со специфическим магнитоуправляемым сорбентом, в результате которого исходная концентрация антител к 5'-НТ и ПНФ уменьшилась в 2,7 2,8 раза, а уровень АТ к ГДА снизился почти в 3,5 раза (см. рисунок 8). |