|
физико-химическим, биологическим воздействиям; возможность проведения регенерации позволяет добиться неоднократного их применения, что ведет к значительному экономическому эффекту. Включение молекулы фермента в какуюлибо изолированную фазу может осуществляться различными способами: фермент может быть ковалентно связан с этой фазой, адсорбирован на ней или физически включен в нее. Иммобилизация может приводить к некоторым изменениям параметров ферментативной реакции, таких как максимальная скорость реакции, константа Михаэлиса, оптимум температуры и pH и т.п. Нами был применен метод эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением в структуру гранул магнитного материала, благодаря которому водорастворимые антигены фиксировались в пространственную решетку полиакриламидного геляметодом "механического" включения без образования?ковалентных связей [25], что позволило сохранить антигены,(СОД, FP, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО) в максимально нативном состоянии. Иммобилизация биологически активных веществ происходила в поверхностном слое "двойной" гранулы, что позволило создать высокую концентрацию I антигена именно в.реакционно активной зоне, качественно и количественно‘увеличив: сорбционную емкость препарата. Процедура иммобилизации используемых энзимов не изменяла их ферментативной,активности, приводила к стабилизации фиксируемого фермента, повышая устойчивость к внешним воздействиям, благодаря чему созданные препараты имели длительный срок хранения. 4 Несомненным преимуществом проведения полимеризации биологически активных веществ с целенаправленным ориентированием химических групп, входящих в антигенные детерминанты, является возможность фиксации в полиакриламидном носителе значительного количества антигена, что способствовало повышению чувствительности используемого метода иммунодиагностики (иммуноферментный анализ) для выявления соответствующих аутоантител. На основе полученных ИГАП с магнитными свойствами были разработа-* ны условия постановки и проведения количественных иммуноферментного-и иммунофлуоресцентного методов определения специфических антител. Пред |
занных с ними иммунологических нарушений [13, 49]. Учитывая актуальность подобных исследований, в литературе стали появляться работы, посвященные изучению энзимного статуса организма при РЗ. Наряду с этим возросло число исследований, направленных на изучение процессов аутоантителообразования к ферментам, в частности антиоксидантного ряда, при воспалительных и дегенеративно-дистрофических заболеваниях суставов. Иммунологические же нарушения, связанные с изменением пуринового метаболизма у больных РЗ, рассмотрены пока в единичных работах [21, 49, 138]. Возможности лабораторной диагностики РА могут быть значительно расширены благодаря применению иммунологических методов с использованием иммобилизированных форм различных биополимеров. Иммобилизированные природные высокомолекулярные соединения имеют целый ряд неоспоримых преимуществ: они обладают механической прочностью; устойчивы к экзогенным физико-химическим, биологическим воздействиям; возможность проведения регенерации позволяет добиться неоднократного их применения, что ведет к значительному экономическому эффекту. Включение молекулы фермента в какую-либо изолированную фазу может осуществляться различными способами: фермент может быть ковалентно связан с этой фазой, адсорбирован на ней или физически включен в нее. Иммобилизация может приводить к некоторым изменениям параметров ферментативной реакции, таких как максимальная скорость реакции, константа Михаэлиса, оптимум температуры и pH и т.п. Нами был применен метод эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением в структуру гранул магнитного материала, благодаря которому водорастворимые антигены фиксировались в пространственную решетку полиакриламидного геля методом "механического" включения без образования ковалентных связей [13], что позволило сохранить антигены (5'-НТ, ПНФ и ГДА) в максимально нативном состоянии. Иммобилизация биологически активных веществ происходила в поверхностном слое "двойной" гранулы, что позволило создать высокую концентрацию антигена именно в реакционно активной зоне, качественно и количественно увеличив сорбционную емкость препарата. Процедура иммобилизации используемых энзимов не изменяла их ферментативной активности, приводила к стабилизации фиксируемого фермента, повышая устойчивость к внешним воздействиям, благодаря чему созданные препараты имели длительный срок хранения. Несомненным преимуществом проведения полимеризации биологически активных веществ с целенаправленным ориентированием химических групп, входящих в антигенные детерминанты, является возможность фиксации в полиакриламидном носителе значительного количества антигена, что способствовало повышению чувствительности используемого метода иммунодиагностики для выявления соответствующих аутоантител. I В нашей работе была предпринята попытка проведения комплексной I оценки изменений энзиматической и иммунологической' активности трех основных ферментов гуаниновой ветви пуринового метаболизма (5'-НТ, ПНФ и ГДА) при ревматоидном артрите, а также' причин, способных оказывать влияние на их функционирование. Ранее была показана возможность образования аутоантител к 5'-НТ при ревматоидном артрите [21], но результатов изучения антител к ПНФ и ГДА при РА опубликовано не было. В настоящем исследовании нам впервые удалось продемонстрировать связь ферментных и иммунных механизмов развития ревматоидного артрита через выработку антител к основным ферментам гуаниновой ветви пуринового катаболизма (5'-НТ, ПНФ и ГДА). Достаточный процент положительных результатов определения АТ к 5'-НТ, ПНФ’и ГДА у больных РА (соответственно у 53,9%, 59,5% и 44,9%) позволяет предположить, что механизм образования аутоантител к данным ферментам долi |