полностью ингибировалась специфическими антителами (р<0,0001), в отличие от растворимой формы фермента, при использовании которой хотя и наблюдалось снижение активности, но не столь существенное (р<0,0012). Совершенно другая картина наблюдалась при изучении влияния специфических иммуноглобулинов на активность КО: активность растворимой формы КО после взаимодействия со специфическими («чистыми») Ат увеличилась незначительно (р=0,151), а увеличение активности иммобилизированной формы КО по сравнению с исходными значениями произошло в среднем на 25-30% (р=0,047). Выявленное снижение активности изучаемых ферментов после взаимодействия. с антителами происходит, вероятно, вследствие конформационных изменений молекулы фермента, приводящих к некоторому разобщению сближенных в пространстве аминокислотных остатков, образующих активный центр фермента. Активность иммобилизированной формы энзима снижается; как правило, в % большей степени, чем растворимой, так как включение энзима в жесткую структуру геля препятствует существенным пространственным изменениям его молекулы. Увеличение активности КО после взаимодействия с антителами может быть связано с конформационными изменеиями молекулы фермента, способствующими трансформации D-формы (КДГ) в О-форму (КО) энзима. Нами изучалось содержание Ат к СОД; ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ; ГДА, КО у 30 доноров, 48 больных ОА и 178 больных РА в зависимости от активности патологического процесса, характера.течения, клинического варианта и других особенностей заболевания. Исследования проводились во время лечения больных ОА и РА в условиях стационара, что дало возможность оценить ' использование данных иммунологических тестов в качестве критериев объективизации эффективности проводимой терапии. При определении средней концентрации антител к изучаемым ферментам в донорских сыворотках был определен уровень нормальных показателей оптической плотности (для Ат к СОД, ГР и КАТ —М ± 2с; для Ат к АДА М ± За; для Ат к ЦП, 5-НТ, ПНФ, ГДА и КО М ± 5а) и установлена верхняя граница нормы (показатели, превышающие значения 0,104 ед. для Ат к СОД, 0,095 ед. для Ат к |
Ферментативная активность иммобиллизированной ГДА практически полностью ингибировалась специфическими антителами (р<0,0001), в отличие от растворимой формы фермента, при использовании которой хотя и наблюдалось снижение активности, но не столь существенное (р<0,0012). Включение фермента в пространственную решетку полиакриламидного геля (иммобилизированная форма) придает антигену (5'-НТ, ПНФ, ГДА) новые свойства, благодаря которым он приобретает определенные преимущества перед растворимой формой. Такой метод приводит к возникновению незначительных конформационных изменений, сохраняющих активность фермента, но, в то же время, способствующих, например, экспрессии гидрофобных участков молекулы энзима, содержащих «скрытые эпитопы». Ат к 5-НТ А т к ПНФ А т к ГДА □ До сорбции Ш П осле сорбции Рисунок 8. Содержание антител к 5'-НТ, ПНФ, ГДА в сыворотке крови больных РА после взаимодействия со специфическим магнитоуправляемым сорбентом. Параллельно в иммуноферментном методе были исследованы сыворотки крови больных РА (п=30 для каждой серии опытов) на наличие антител к 5'-НТ, ПНФ, ГДА после взаимодействия со специфическим магнитоуправляемым сорбентом, в результате которого исходная концентрация антител к 5'-НТ и ПНФ уменьшилась в 2,7 2,8 раза, а уровень АТ к ГДА снизился почти в 3,5 раза (см. рисунок 8). • # » a a t * жен подчиняться общим закономерностям: индукции аутоантител при ауто■ иммунной патологии [74, 76, 155]. ► * * % V Нами изучалась активность З -НТ^ ГШФ^ГДА и содержание АШк данг $ ным энзимам у 30 доноров, 48 больных ОА и 89 больных РА в зависимости от активности патологического процесса, характера течения' клинического л ■ Й варианта и других особенностей заболевания. Исследования проводились;во ф время лечения больных РА в условиях стационара, что дало возможность ш • * . оценить использование энзимных и иммунологических тестов в» качестве • * ■ I • критериев объективизации эффективности проводимой^терапии:• • . * . р ' # . * определении средней концентрации антител к изучаемым*ферменt* там в донорских сыворотках был определен уровень нормальных показателей г оптической:плотности (М ± 3ст) и установлена верхняя*граница нормы (пока* зателиj.превышающие значения 0;08 е.о.п. для 5'-НТ, 0,097 е.о.п. для ШНФ и ■ 0,072 е.о.п. для*ПДА, считались положительными по соответствующим:антит* 1 телам). . • . ../ t ш * * г * . • * * • ’ * „ % ♦ » ' * * * • Проведенные исследования: по содержанию антител к 5'-НТ, ПНФ?и. ■ . г у здоровых лиц в зависимости от пола и>возраста существенных различии не:выявили. I Под нашим наблюдением находились 89 больных РА, из которых 639 (70,8%) женщин и 26 (29^2%) мужчин. Средний:возраст больных 48г,9 ± 13-2 ■ * 1 . * Г » * ' года. Средняя продолжительность заболевания—11,14 ± 2,33:лет: Преоблада4 Ь ли больные РА в возрасте 31-50 лет (75,2%), с продолжительностьюзаболе-I * ( ► * , вания от 6 до Юлет (49,4%), со II степенью активности ревматоидногошро1 ' t I J цесса-(72%), суставной формой (61,8%) немедленно•прогрессирующим».тече• ' • : нием (63%).\ / ' t ъ , » ' 1 ^ ‘ ^ ‘ * • Г • У больных РА (группа в целом) при поступлении!на:лечение по-срав► Ф ' 4 нению со здоровыми-лицами обнаружено увеличение содержания:Ат к 5НТ, ПНФ и ГДА.. , Ч г I 1 |