JT-. ч ? Ксантин Высокая активность ГДА у человека обнаружена в печени (78,8 ед.), почках (66,4 ед.), головном мозге (65,8 ед.) [215]. Есть данные об умеренной активности фермента в селезенке, поджелудочной железе, тонкой кишке, легких, сердце и минимальной активности, близкой к нулю —в эритроцитах, лейкоцитах, сыворотке крови [153, 317, 349,]. Данные гистохимического анализа внутриклеточного распределения гуаназы в гепатоцитах человека свидетельствуют о*сосредоточении фермента в ядре, кристах митохондрий, цистернах гладкого и эндоплазматического ретикулома, лизосомах [219,317]. Полученная иммунная-сыворотка, содержащая антитела к ГДА печени человека, формирует единственную линию преципитата с экстрактом данного органа, полностью ингибируя деятельность фермента в печени человека. Результаты проводимого иммуноблотинга показали, что данные антитела связываются с однонбелковой молекулой, обладающей активностью гуаназы [219]. ГДА является аллостерическим ферментом, димером по своей структуре [177,276]. Энзим имеет широкий спектр pH-активности —то 6 до 10. Скорость реакции, катализируемой гуаназой, возрастает при повышении температуры от 25 до 37°С. Сам энзим устойчив до 140°С и почти полностью инактивируется при 165°С в течение 30 минут. Активность ГДА в сыворотке крови практически не изменяется в течение 12 дней при хранении при 115°С [220,317]. Данные литературы по молекулярной массе и удельной активности фермента из печени человека относительно однородны. Выделенная и очищенная гуаназа представляет собой димерный белок, с молекулярной массой каждой подгруппы 55000 59000 Да, молекулярной массой в целом 100000 —120000'Да, обладающий удельной активностью 21,5 —91,5 Е/мг и имеющий две изоформы, отличающиеся по своим кинетическим свойствам: ГДА-1 и ГДА-2 [218,220]. |
В физиологических условиях процессы синтеза и катаболизма пуринов уравновешены, и их соотношение всегда поддерживается в необходимых пропорциях. При патологических состояниях эти соотношения могут нарушаться, что может быть использовано в медицине с диагностическими целями. Ниже представлены обобщенные сведения о биологической роли, физико-химических свойствах некоторых ферментов гуаниновой ветви пуринового метаболизма (ГДА, 5'-НТ и ПНФ), ферментативная и иммунологическая активность которых была изучена нами у больных ревматоидным артритом. Гуаниндезаминаза (гуанинаминогидралаза, гуаназа, ГДА Е.С. 3.5.4.3): Гуаназа —один-из основных ферментов пуринового метаболизма, относится к группе гидролаз, действует на C-N-связи в структуре N-CH-N циклических аминов и катализирует гидролитическое дезаминирование гуанина с образованием ксантина и аммиака. Гу аназ а Высокая активность ГДА у человека обнаружена в печени (78,8 ед.), почках (66,4 ед.), головном мозге (65,8 ед.) [119]. Есть данные об умеренной активности фермента в селезенке, поджелудочной железе, тонкой, кишке, легких, сердце и минимальной активности, близкой к нулю —в эритроцитах, лейкоцитах, сыворотке крови [186, 206]. Распределение активности гуаназы в различных органах показало, что в головном мозге человека наибольшей активностью обладают зрительный бугор и лобный отдел, умеренной область варолиевого моста и затылочный отдел коры, крайне низкой —мозжечек; в почках активность энзима выявлялась ис ключительно в проксимальных канальцах, особенно, в 1 и 2 сегментах нефрона [122]. Данные гистохимического анализа внутриклеточного распределения гуаназы в гепатоцитах человека свидетельствуют о сосредоточении фермента в ядре, кристах митохондрий, цистернах гладкого и эндоплазматического ретикулома, лизосомах. ГДА присутствовала в пределах всей цитоплазмы гепатоцитов. Активность фермента была более сильной на синусоидальной стороне клеток печени и перипортальной области, более слабой —в перивенулярных гепатоцитах. В портальных компонентах (желчных протоках, венах) и фиброзной ткани активность ГДА не определялась [122, 186]. Полученная иммунная сыворотка, содержащая антитела к ГДА печени человека, формирует единственную линию преципитата с экстрактом данного органа, полностью ингибируя деятельность фермента в печени человека. Результаты проводимого иммуноблотинга показали, что данные антитела связываются с одной белковой молекулой, обладающей активностью гуаназы [122]. ГДА является аллостерическим ферментом, димером по своей структуре [96, 159]. Энзим имеет широкий спектр pH-активности —то 6 до 10. Скорость реакции, катализируемой гуаназои, возрастает при повышении температуры от 25 до 37°С. Сам энзим устойчив до t 40°С и почти полностью инактивируется при 165°С в течение 30 минут. Активность ГДА в сыворотке крови практически не изменяется в течение 12 дней при хранении при 1 15°С [123,186]. Данные литературы по молекулярной массе и удельной активности фермента из печени человека относительно однородны. Выделенная и очищенная гуаназа представляет собой димерный белок, с молекулярной массой каждой подгруппы 55000 59000 Да, молекулярной массой в целом 100000 120000 Да, обладающий удельной активностью 21,5 —91,5 Е/мг и имеющий две изоформы, отличающиеся по своим кинетическим свойствам: ГДА-1 и ГДА-2 [121, 123]. |