|
По данным аминокислотного анализа, ГДА является кислым белком с оптимумом рН=8. Очищенная гуаназа эритроцитов мыши в своей структуре имеет от 12 до 25 аминокислот. При этом фермент имеет цепочку из 9 аминокислот, встречающуюся у других аминогидролаз и указывающую на связь с ионами тяжелых металлов, обычно с Zn2+(1 атом Zn на мономер длиной 51000 Да) [250, 341]. Гуаназа содержит также сульфгидрильные группы, не оказывающие существенного влияния на активность фермента, и тиоловые группы, находящиеся в.активном центре или вблизи его, непосредственно участвующие в катализе [220]. Существует довольно много методик определения активности ГДА в различных биологических жидкостях, в основном в сыворотке крови [294]. Это можнообъяснить тем, что в норме активность гуаназы в*ней близка к "0", следовательно, любые сдвиги ферментной активности в сыворотке крови будут наиболее показательными. Изучение активности гуаназы при различных заболеваниях проводилось, в основном, при патологии печени и почек, в клетках которых выявлена наибольшая активность фермента. ГДА считается относительно органоспецифичным ферментом для печени, поэтому любая патология данного органа, сопровождаемаягепатоцеллюлярным повреждением, приводит к повышенному выбросу энзима в кровь. При обследовании больных с различными заболеваниями печени, выявлено повышение активности гуаназы при остром вирусном гепатите, хроническом активном гепатите, хроническом персистирующем гепатите, циррозе печени, жировом гепатозе [261]. По данным других авторов заболевания печени невирусной этиологии сопровождаются лишь незначительным повышением или отсутствием изменении активности фермента. Обнаружены изменения активности гуаназы при алкогольном поражении печени. При гломерулонефритах обнаружено существенное повышение активности [А в сыворотке крови при всех формах заболевания с сохраненной функцией почек. При хронической^почечной недостаточности активность фермента, наоборот, снижалась. Высокая гиперферментемия расценивается'авторами как следствие нарушения проницаемости гистогематологических барьеров при повреждении |
По данным аминокислотного анализа, ГДА является кислым белком с оптимумом рН=8. Очищенная гуаназа эритроцитов мыши в своей структуре имеет от 12 до 25 аминокислот. При этом фермент имеет цепочку из 9 аминокислот, встречающуюся у других аминогидролаз и указывающую на связь с ионами О I тяжелых металлов, обычно с Zn (1 атом Zn на мономер'длиной 51000 Да) « ъ [140, 200]. Гуаназа содержит также сульфгидрильные группы, не оказывающие существенного влияния на активность фермента, и тиоловые группы, находящиеся в активном центре или вблизи его, непосредственно участвующие в катализе [123]. ГДА проявляет узкую специфичность к гуанину (Кмдля фермента из пе-5 чени человека 1,53x10" М) и 8-азагуанину (Кмдля фермента из мозга крысы 6,7x10'5М) в качестве субстратов. По данным дифференциального центрифугирования гомогенатов тканей печени, почек, головного мозгакрыс наибольшая активность выявлена в растворимой (цитоплазматической) фракции фермента [164]. Выделенные два изофермента гуаназы из мозга и из печени крысы в присутствии возрастающей концентрации гуанина изменяли активность ГДА-2 в гиперболической зависимости, а ГДА-1 в сигмоидальной, что типично для аллостерических ферментов. Введение гуанина in vivo индуцировало увеличение активности гуаназы в печени крысы на 45-50%, а в мозгу на 35-40%. На этом фоне в митохондриальной фракции данных органов было обнаружено ингибирующее фермент вещество, количество которого также возрастало при введении гуанина; хлорамфеникол полностью подавлял увеличение ингибирующей активности, незначительно снижая при этом возрастание активности гуаназы. Подобный ингибитор ГДА был выделен из митохондрий клеток мозга человека. Он представляет собой недиализированный, нерастворимый в воде белок, стабильный в течение более 30 дней (при t=16°C) и полностью инактивируемый за 5 минут при\ t=50°C [136]. В настоящее время синтезирование и апробированно на печени кролика 5 аналогов встречающегося в естественных условиях ингибитора гуаназы —азепиномицина. Данные производные являются умеренными ингибиторами ГДА, а наличие дополнительных Н-связей увеличивает их ингибирующие свойства [168]. Исследование влияния некоторых ионов металлов показало, что ионы Л I Pb , Ag , Hg вызывали инактивацию гуаназы на 59, 80 и 30%, соответственно. Совместное введение РЬ2+и Hg+оказывало синергическое подавляющее действие на фермент. Кинетика ингибирования ионами РЬ имеет неконкурентный характер с Kj 3.0x10’6М, а введение ЭДТА полностью реактивирует гуаназу. Существует довольно много методик определения активности ГДА в различных биологических жидкостях, в основном в сыворотке крови [171]. Это можно объяснить тем, что в норме активность гуаназы в ней близка к "0", следовательно, любые сдвиги ферментной активности в сыворотке крови будут наиболее показательными. Изучение активности гуаназы при различных заболеваниях проводилось, в основном, при патологии печени и почек, в клетках которых выявлена наибольшая активность фермента. ГДА считается относительно органоспецифичным ферментом для печени, поэтому любая патология данного органа, сопровождаемая гепатоцеллюлярным повреждением, приводит к повышенному выбросу энзима в кровь. При обследовании больных с различными заболеваниями печени, выявлено повышение активности гуаназы при остром вирусном гепатите, хроническом активном гепатите, хроническом персистирующем гепатите, циррозе печени, жировом гепатозе [147]. По данным других авторов заболевания печени невирусной этиологии сопровождаются лишь незначительным повышением или отсутствием изменений активности фермента. Обнаружены изменения активности гуаназы при алкогольном поражении печени. Повышение активности гуаназы наблюдалось при остром инфаркте миокарда, пороках сердца, сопровождаемых застойными явлениями печени. Изменение активности фермента являлось своеобразным признаком присутствия повреждения печени при этих патологиях [121]. При гломерулонефритах обнаружено существенное повышение активности ГДА в сыворотке крови при всех формах заболевания с сохраненной функцией почек. При хронической почечной недостаточности активность фермента, наоборот, снижалась. Высокая гиперферментемия расценивается авторами как следствие нарушения проницаемости гистогематологических барьеров при повреждении почечных тканей с выходом фермента в кровь, а гипоферментемия связана не с ингибированием фермента, а с тяжелым повреждением почек со значительной атрофией почечной ткани, в связи с чем, и снижается поступление фермента в периферическую кровь [51]. Повышение активности гуаназы выявлено в опухолевых клетках грудных тканей, раке желудка, почек, легкого, что можно объяснить повышенным в них ДНК-оборотом, сопровождаемым ускоренным обменом нуклеотидов [89]: Данные по изучению активности гуаназы при ревматологических заболеваниях в доступной нам литературе скупы и противоречивы. Единичные работы свидетельствуют о повышении активности ГДА при ревматоидном артрите и СКВ [14,68]. Данных об участии антител к ГДА в изменении ферментативной активности при ревматических заболеваниях нами обнаружено не было. 5 -нукпеотидаза (5-рибонуклеотид-фосфогидролаза, 5'-НТ; ЕС 3.1.3.5) 5'-НТ играет существенную роль в катаболизме пуринов, участвуя в превращении нуклеотидов в нуклеозиды, катализируя следующую реакцию: У t * t |