|
* но близки (от 48000 до 70000). Однако обнаружение форм 5'-НТ с большей молекулярной массой (из мозга быка —134000;.из печени быка —140000, из цитозоля I эмбрионов 165000) позволило исследователям прийти к заключению ■о наличии t у энзима субъединиц и его димерной структуре [156]. Доказано наличие множественных молекулярных форм 5'-НТ —изоферментов; [278]. Антисыворотка против 4 5'-НТ ингибирует, данный фермент в различных отделах головного мозга крысы неодинаково. В; связи с этим было высказано предположение 0!существовании р • л иммунологических изоферментов экто-5'нуклеотидазы. При этом одна из изо-* ф форм хорошо связывается с конканавалинтА.сефарозой (на;70%),.другая —плохол (на 18%) [184]; t « I ■ На активность 5'-НТ. большое влияние оказывают рИсреды, наличиегактигI г . * 1 r f Ъ 1 ь ^ 4 ваторовш: ингибиторов, а также бивалентные ионы,металлов?,(ионьгмагния; мар• > 1 т • ганца;,цинка;и др; в дозе до 3-4 мкм являются активаторами энзима, а в.дозе от 5-г * I % 10*мкм:—ингибируют его?активность); В целом ингибиторов 5'-НЖ значительно■ * ф больше; чем*активаторов; Имеются*работы;, показывающие возможность ■ингиби% рования-активности 5'-НТ специфическими;антителами [40; 184].. Кроме того, на А 1 Г I активность 5НТ оказывают влияние биологически: активные вещества,.гормоны,% I % « , лекарственные препараты. Так,цитокины;, глюкокортикоиды; паратиреоидныйi I ♦ гормон, простагландины Е-2 стимулируют активность 5'-НТ [115; 179, 237,. 312]. Гипоксия вызывает повьппение активности 5'-НТ, гипероксия;оказывает противо* положный эффект [235];. ч . • В распределении 5'-НТ по органам и тканям имеется много неясностей и ■ < противоречий; Вероятно; это связано с видовыми различиями: животных, а также особенностями; методических подходов. Более определенные результаты получе-г * . *I ны при: изучении, внутриклеточной локализации 5'-НТ. Показано; что энзим; содержится; практически во всех внутриклеточных структурах; с наибольшим со-t• г держанием:вsядре1клетки. В гомогенатах плаценты;человека;максимальная актив-\ I А j ность 5'-НТ определяется в микросомах, а в цитозоле —всего 7% от общей активности энзима. |
лимфоцитах, но не на натуральных киллерах [54]. CD73 запускает процесс образования сигнальных внутриклеточных метаболитов при активации лимфоцитов, а также передачу сигнала в нейронах. Имеются доказательства влияния экто-5'-НТ на процессы регенерации, пролиферации глиальных клеток [141]. В клинической биохимии чаще всего различают 2 формы 5'-НТ: растворимую (цитозольную) и мембраносвязанную, или экто-5'-НТ, причем последняя расположена на внешней плазматической клеточной мембране [ПО]. Обе формы содержат высокие концентрации фосфолипидов, проявляют одинаковую активность в отношении 5'-АМФ и 5'-ГМФ. Причем в сыворотке крови присутствуют обе формы 5'-НТ, и экто-5'-НТ преобладает. В синовиальной жидкости сустава 2/3 5'-НТ находится в растворимой форме, а 1/3 —в мембраносвязанной [198]. 5'-НТ относится к классу гидролаз, действует на сложные эфирные связи фосфомоноэстеров. Состоит из одной полипептидной цепи и представляет со* бой термостабильный глико-(сиало)протеид из 589 аминокислотных остатков [201]. Молекулярные массы 5'-НТ, несмотря на видовые различия животных, достаточно близки (от 48000 до 70000). Однако, обнаружение форм 5'-НТ с молекулярной массой (из Ж 134000, из печени быка 140000, из цитозоля эмбрионов —165000), что позволило исследователям прийти к заключению о наличии у энзима субъединиц и его димерной структуре [82]. Доказано наличие множественных молекулярных форм 5'-НТ —изоферментов [160] Из эритроцитов человека выделено два изофермента 5'-НТ, преимущественно гидролизирующие пиримидин 5'монофосфаты и пиримидин З'монофосфаты соответственно. Кинетический анализ показал, что первый изофермент обладал свойствами фосфотрансфераз, перенося фосфатный остаток на различные нуклеозиды, включая их аналоги, используемые для химиотерапии злокачественных новообразований и для лечения аутоиммунных заболеваний [78]. Cunha и соавт. показали, что антисыворотка против 5'-НТ ингибиру ет данный фермент в различных отделах головного мозга крысы неодинаково. В связи с этим было высказано предположение о существовании иммунологических изоферментов экто-5'нуклеотидазы. При этом одна из изоформ хорошо связывается с конканавалин-А сефарозой (на 70%), другая плохо (на 18%) [101]. Доказано, что 5'-НТ может использовать в качестве субстратов не менее 14 нуклеотидфосфатов, причем, если сродство 5'-НТ к АМФ принять за 100%, то энзим из плаценты человека имеет следующую активность по отношению к другим субстратам: ЦМФ 122%, ГМФ 68%, ПМФ 63%, КМФ 28%. На активность 5'-НТ большое влияние оказывают pH среды, наличие активаторов и ингибиторов, а также бивалентные ионы металлов (ионы магния, марганца, цинка и др. в дозе до 3-4 мкм являются активаторами энзима, а в дозе от 5-10 мкм —ингибируют его активность). В целом ингибиторов 5'-НТ значительно больше, чем активаторов. Имеются работы, показывающие возможность ингибирования активности 5'-НТ специфическими антителами [21, 101]. Кроме того, на активность 5НТ оказывают влияние биологически активные’вещества', гормоны, лекарственные препараты. Так, цитокины, глюкокортикоиды, паратиреоидный гормон, простагландины Е-2 стимулируют активность 5'-НТ [55, 98, 134, 182]. Гипоксия вызывает повышение активности 5'-НТ, гипероксия оказывает противоположный эффект [132]. В распределении 5'-НТ по органам и тканям имеется много неясностей и противоречий. Вероятно, это связано с видовыми различиями животных, а также особенностями методических подходов. Более определенные результаты получены при изучении внутриклеточной локализации 5'-НТ. Показано, что энзим содержится практически во всех внутриклеточных структурах, с наибольшим содержанием в ядре клетки. В гомогенатах плаценты человека максимальная активность 5'-НТ определяется в микросомах, а в цитозоле —всего 7% от общей активности энзима. В связи с тем, что 5'-НТ из разных органов и тканей обладает неодинаковыми физико-химическими свойствами и различиями в сродстве к нуклеоти |