|
ликолем 6000 по Haskova в модификации Б.А.Лемперта. Определение антинуклеарного фактора по Кунсу проводилось методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием в качестве субстрата криостатных срезов печени белой крысы в качественном варианте с выделением типа и интенсивности свечения [67]. Общеклинические лабораторные исследования выполнялись по методикам, описанным ранее [67]. У больных проводился общий анализ крови с подсчетом лейкоцитарной формулы, тромбоцитов (по показаниям —ретикулоцитов), общий анализ мочи с количественным определением протеинурии и микроскопическим исследованием. Биохимические анализы включали определение билирубина, аминотрансфераз (аланиновой и аспарагиновой), мочевины и креатинина сыворотки, общего белка крови. По показаниям'проводилось исследование коагулограммы. 4.8. Биохимическиеметодыисследования Активность изучаемых ферментов определялась в сыворотке крови, которая' забиралась у больных (и здоровых) из локтевой вены утром' до приема пищи. Кровь со следами гемолиза не использовалась. Исследование энзиматической активности СОД‘ ГР, КАТ, ЦП, АДА, ГДА, 5-НТ, ПНФи КО проводилось в.день забора крови. 4.8.1: Определение активности супероксиддисмутазы СОД катализирует реакции-рекомбинации супероксидных радикалов кислорода Ог" с образованием перекиси водорода Н2О2 и кислорода Ог: 2 0 2‘ + 2Н" < СОД »Н202+Ог Активность эритроцитарной СОД определяли в гемолизате эритроцитов: к 0,1 мл эритроцитарной массы, после отмывания ее физиологическим раствором, добавляли 0,9 мл трис-HOI буфера 0,005 М (рН=7,4), 0,25 мл этилового спирта, 0,15 мл хлороформа. Супернатант плазмы для определения активности плазменной СОД готовили путем добавления к 1 мл плазмы 300 мг КН2РО4 ,0,25 мл этилового спирта и 0,15 мл хлороформа. После помешивания стеклянной палочкой при +4°С в течение 15 минут и центрифугирования при 3000 об/мин (15 минут) супернатанты |
проводилось методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием в качестве субстрата криостатных срезов печени белой крысы в качественном варианте с выделением типа и интенсивности свечения [34]. Общеклинические лабораторные исследования выполнялись по методикам, описанным ранее [34]. У больных проводился общий анализ крови с подсчетом лейкоцитарной формулы, тромбоцитов (по показаниям —ретикулоцитов), общий анализ мочи с количественным определением протеинурии и микроскопическим исследованием. Биохимические анализы включали определение билирубина, аминотрансфераз (аланиновой и аспарагиновой), мочевины и креатинина сыворотки, общего белка крови. По показаниям проводилось исследование коагулограммы. 3.7. Биохимические методы исследования Активность изучаемых ферментов определялась в сыворотке крови, которая забиралась у больных (и здоровых) из локтевой вены утром до приема пищи. Кровь со следами гемолиза не использовалась. Исследование энзиматической активности 5'-НТ, ПНФ и ГДА проводилось в день забора крови. 3.7.1. Определение активности 5'-нуклеотидазы Для определения активности 5'-НТ использовалась методика, предложенная Wood R., Williams D. (1981), основанная на измерении количества неорганического фосфора в результате дефосфорилирования АМФ под влиянием 5'НТ [197]. При использовании АМФ в качестве субстрата его дефосфорилирование происходит не только за счет 5'-НТ, но и неспецифических щелочных фосфатаз (ЩФ), что лишает реакцию специфичности. В данной методике этот недостаток устраняется путем введения в инкубационную среду хлористого никеля, полностью ингибирующего активность 5'-НТ. Вследствие этого в методике в одной пробе определяется общая фосфатазная активность (5'-НТ и ЩФ), а в другой пробе —только активность ЩФ (активность 5'-НТ ингибирована нике |