|
32 / В настоящее время наибольшее развитие получили два исследовательских метода этого направления: морфометрия (1та^е апа1у$1$) и проточная цитометрия [8, 9]. Благодаря внедрению метода лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии появилась реальная возможность определять плоидность клеток опухоли, соотношение клеток в различных фазах клеточного цикла, исключая субъективизм исследования, и, следовательно, объективно выявлять особенности пролиферации и аномальное содержание ДНК [151, 155]. Способность к неограниченному размножению является одной из главных особенностей опухолевых клеток. Наиболее ранними событиями в процессах канцерогенеза и прогрессировании опухолей, являются нарушение механизмов пролиферации и апоптоза в опухолевых клетках. На этой стадии теряются нормальные механизмы контроля клеточного деления и апоптоза. Количество делящихся клеток является интегральным показателем независимости от ростовых сигналов, нечувствительности к сигналам, блокирующим деление, неограниченной возможности деления, адекватного ангиогенеза. Оценка пролиферативной активности может помочь опрсдслпть агрессивность и злокачественность течения опухолевого процесса [65], а также в совокупности с другими факторами, возможно, и вероятность ответа на проводимую терапию. Большинство методов, включая индекс клеток, меченных НЗ-тимидпном, основано на мечении клеток, находящихся только в 3 фазе клеточного цикла. Антитела к Кл-67 антигену, который присутствует в клетках поздней 01, 5,02 и М фазах, обнаруживаются только в пролиферирующих клетках. Связь между процентом клеток, меченных Кл-67, и прогнозом не ясна [115, 150, 168]. Иммуноокрашивание Кл-67 значительно выше в гиподиплоидных и мультиплоидных участках опухоли [157] и коррелирует со степенью дифференцировки, клеточностыо и процентом клеток в 3-фазе [107]. о |
К1-67 коррелирует со степенью дифференцировки опухоли [Ти^екаг М. Р. 1991, $1топу Т 1996]. В последние годы стало очевидным, что возникновение и прогрессия опухоли во многом связаны со структурными особенностями клеточного генома и его мутациями [Барышников АЛО., Степанова Е.В. 2000, Зборовская И. Б. 2003, О. Роп1аш е1 а1. 1995]. Благодаря внедрению метода лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии, появилась реальная возможность определять содержание ДНК в клетках опухоли, ее плоидность, соотношение клеток в различных фазах клеточного цикла. Так по данным Б.Е. Полоцкого 1995, при отсутствии регионарных метастазов диплоидные опухоли менее агрессивны по сравнению с апеуплоидпыми аналогами. При немелкоклеточном раке легкого обнаружено,’что ансуплоидные новообразования с высоким индексом ДНК имеют меньшее время удвоения опухоли, чем диплоидные (Ь. Тепйоп и соавт., 1983). При использовании показателя ядерно-цитоплазматического отношения Н. Азатига е1 а1. 1989, выявил корреляцию между площадью ядер и содержанием в них ДНК, а прогрессирование процесса сопровождалось увеличением содержания ДНК в клетках опухоли. Таким образом, первостепенное значение в индивидуальном прогнозировании приобретает комплексный подход, наиболее полно отображающий систему взаимоотношений опухоли с организмом, что в свою очередь позволит клиницисту выработать адекватную тактику последующего лечения и/или наблюдения конкретного больного. 8 особенностей, а, следовательно, более точного прогнозирования результатов хирургического лечения. В настоящее время наибольшее развитие получили два исследовательских метода этого направления: морфометрия (’ила&е апа1уз15) и проточная цитометрия [5, 6]. Благодаря внедрению метода лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии появилась реальная возможность определять плоидность клеток опухоли, соотношение клеток в различных фазах клеточного цикла, исключая субъективизм исследования, и, следовательно, объективно выявлять особенности пролиферации и аномальное содержание ДНК [177,180]. Нарушения кариотипа в злокачественных опухолях варьируют в широких пределах, и эти изменения касаются как числа хромосом, так и их структурных трансформаций [146]. Количество ДНК в ядре пропорционально общему содержанию хромосомного материала. В постмитотических нормальных соматических клетках человека содержится диплоидный набор хромосом, который равняется 46 хромосомам и соответствует 01/0 фазе клеточного цикла; в 8 фазе клеточного цикла это значение равняется Зс, а в 02+М фазе 4с [64]. С помощью ДНК-проточной цитометрии с высокой достоверностью можно определить степень плоидности клеток опухоли с одновременной оценкой их пропорции в различных фазах клеточного цикла (0.0. Ьаегит и соавт., 1981) [126]. При исследовании методом проточной цитомстрии могут возникать трудности при малом количестве опухолевых клеток в изучаемом материале [74]. При достаточном их содержании на гистограммах четко определяется их доминирующая стволовая линия, которая имеет диагностическое значение [92, 95, 177]. Популяция с одним модальным пиком, расположенным в области диплоидных стандартов (клетки нормальных тканей, лимфоциты, гранулоциты), считается диплоидной опухолью, при наличии 46 |