|
55 анатомии болезней детского возраста НИИ морфологии человека (рук. член-корр. РАЕН, профессор А.П.Милованов). Кусочки тканей запивались в парафиновые блоки, готовили микротомные срезы толщиной 5-7 мкм, которые после стандартных гистологических проводок окрашивались гематоксилином и эозином, а также пикрофуксином по Ван Гизону. При просмотре микропрепаратов выявлялись изменения в пределах эндометрия, в пограничных слоях миометрия, в плаценте или хориальной ткани. Особое внимание уделялось изучению процесса цитотрофобластической инвазии в разные гестационные сроки. Математико-статистический анализ полученных результатов. Полученные в ходе наблюдения и обследования каждой пациентки сведений заносились в специально разработанную компьютеризованную базу данных («Карту обследования больной с НБ») для последующего их количественного анализа и выявления основных закономерностей. Статистическую обработку полученных результатов производили на персональном компьютере Intel Pentium III 800 с применением стандартных пакетов программ прикладного статистического анализа (GraphPad Instant, Statistica for Windows v.4.0, Microsoft Excel 2001 и др.) Проверку гипотез о равенстве двух средних проводили с помощью tкритерия Стъюдента. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий или факторных влияний) принимали равным 0,05. |
Для количественной оценки АМГФ и ПАМГ в СК, ГЭ и смывах из полости матки использовали твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), «сэндвич»-вариант, на основе моноклональных антител. Технология метода: 96-луночные планшеты («Costar») сенсибилизировали моноклональными антителами (МАТ) против АМГФ и ПАМГ (10мкг/мл) на карбонат бикарбонатном буфере pH 9,5. В лунки вносили по 100 мкг стандарта антигена в разведениях (от 100 до 0.7 нг/мл)и тестируемые жидкости, инкубировали в течение 1 ч при 37°С и затем добавляли по 100 мкл вторых МАТ с пероксидазой в разведении 1:1000. После инкубации при 37°С в течение 1 ч вносили 0.4% раствор офенилендиамина в цитрат — фосфатном буфере pH 4,7 с 0,1% перекиси водорода. Через 20 мин реакцию останавливали 50% серной кислотой. Результаты учитывали на «Multiskan Titertek, Flow». П атоморфологнческие исследования Материал соскоба из полости матки пациенток I группы после неразвивающейся беременности и у женщин II группы после медицинского аборта фиксировался в растворе нейтрального формалина. Его гистологический анализ проводился в лаборатории патологической анатомии болезней детского возраста НИИ морфологии человека (рук. член-корр. РАЕН, профессор А.П.Милованов). Кусочки тканей заливались в парафиновые блоки, готовили микротомные срезы толщиной 5-7 мкм, которые после стандартных гистологических проводок окрашивались гематоксилином и эозином, а также пикрофуксином по Ван Гизону. При просмотре микропрепаратов выявлялись изменения в пределах эндометрия, в пограничных слоях миометрия, а также в плаценте или хориальной ткани. Пациенткам I группы после лечения с целью определения его эффективности проводилось гистологическое исследование биоптатов эндометрия, полученных с помощью аспирационной кюретки “пайпель”. Аспирационная пайпель-биопсия с точки зрения последующего патоморфологического исследования эндометрия имеет ряд преимуществ перед диагностическим выскабливанием стенок матки. Пайпель является одноразовым стерильным инструментом, что исключает возможность инфицирования, для его введения в полость матки не нужно расширять цервикальный канал, процедура атравматична, безболезненна и осуществляется в амбулаторных условиях, что делает этот диагностический процесс значительно дешевле. Поэтому пайпель-биопсия эндометрия может использоваться в качестве скриннингового метода для гистологической оценки состояния слизистой оболочки (наличие или отсутствие воспалительных изменений и адекватность секреторной трансформации во вторую фазу цикла) матки в прегравидарный период. Математико-статистический анализ полученных результатов. Полученные в ходе наблюдения и обследования каждой пациентки сведений заносились в специально разработанную компьютеризованную базу данных («Карту обследования больной с НБ») для последующего их количественного анализа и выявления основных закономерностей. Статистическую обработку полученных результатов производили на персональном компьютере Intel Pentium III 600 с применением стандартных пакетов программ прикладного статистического анализа (GraphPad Instant, Statistica for Windows v.4.0, Microsoft Excel 2001 и др.) Проверку гипотез о равенстве двух средних проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий или факторных влияний) принимали равным 0,05. 52 |