Проверяемый текст
Новикова, Диана Сергеевна; Показатели воспалительных, аутоиммунных процессов и спектральные показатели вариабельности ритма сердца больных с желудочковыми нарушениями ритма сердца (Диссертация 2004)
[стр. 69]

наиболее обоснованным определение именно уровня СРБ и частоты его повышенных значении.
Всем лицам, включенным в исследование, определение СРБ высокочувствительным методом проводилось в отделе неирогуморальных иммунологических исследований РКНПК Росмедтехнологий под руководством профессора Масенко В.П., нефелометрическим методом с помощью диагностических наборов N High Sensitivity CRP, фирмы -Dade Behring, США, на анализаторе BN ProSpec производства Dade Behring.
Чувствительность метода равна 0,175 мг/л для измерений выполненных с использованием образцов разведенных 1:20.
Коэффициент вариабельности 7,6% [290].
Согласно международным рекомендациям [291] сыворотки с содержанием СРБ более 3,0 мг/л рассматривались как СРБ-положительные.
П.2.2.
Методика определения аутоантител к
Pi-адренорецепторам Среди кардиоспецифических маркеров аутоиммунных процессов У больных с нарушениями ритма сердца аутоантитела к Pi-АР представляют особый интерес поскольку доказано, что они являются агонистами Pi-АР, т.е.
обладают катехоламиноподобными эффектами, вызывая стимуляцию рецепторов in vitro и тем самым могут создавать условия для развития аритмий.
[98,99, 294].
Аутоантитела к pjAP в сыворотке крови больных всех трех групп и лиц контрольной группы определялись методом прямого иммуноферментного анализа с использованием в качестве антигена синтетического фрагмента, содержащего 26 аминокислот второй петли PiАР (197 [42, 47, 66].
Оптическую плотность исследуемого образца измеряли на многоканальном спектрофотометре при длине волны 492 нм.
За границу нормы было принято среднее арифметическое значение + 2 стандартных отклонения (M+2SD) оптических
плотностей, полученных в группе здоровых доноров (п=20).
Исследование проводилось в лаборатории ксенотрансплантации, руководимой
[стр. 42]

Согласно международным рекомендациям верхняя граница нормы ИЛ-6 в сыворотке крови составила 9,0 пг/мл [Pearson Т.
2003].
П.2.3.
Методика определения аутоантител к
Pi-адренорецспторам.
Определение аутоантител к Pi-АР в сыворотке крови проводилось в лаборатории ксенотрансплантации НИИТ и ИО М3 РФ (руководитель —д.м.н., проф.
Тоневицкий А.Г.) методом прямого иммуноферментного анализа с использованием в качестве антигена синтетического фрагмента, содержащего 26 аминокислот второй петли Pi-AP (197 222).
Принцип исследования: Раствор пептида в 0.04 М карбонатном буфере (рН=9,6) с концентрацией 1мкг/мл вносили по 100 мкл в лунки поливинилхлоридных планшетов для ИФА (“Titertek”, Шотландия) и выдерживали в течение 18 часов при 4°С.
Для блокирования неспецифических снятого молока в фосфатно-солевом буфере который вносили по 100 мкл в лунки планшета и выдерживали в течение 30 мин при 37°С.
Исследуемые образцы разводили 3%-ым раствором снятого молока в ФСБ (при необходимости добавлялся “Tween-20” до концентрации 0,05% —ФСБ-Т), вносили в лунки о по 100 мкл и выдерживали на планшете в течение 1,5 —2 часов при 37 С.
Планшет промывали 3 раза ФСБ-Т.
Затем в лунки вносили по 0,1 мл кроличьих антител, меченных пероксидазой, против IgG человека в разведении (1:1000) в ФСБ-Т и инкубировали 45 мин опри 37 С.
Далее планшет отмывали ФСБ-Т 3 раза, после чего в лунки вносили субстратный раствор (0,05% ортофенилендиамин и 0,01% перекись водорода в 0,1М цитратно-фосфатном буфере; рН=4,7).
После появления, в результате действия пероксидазы на субстрат, желтой окраски, реакцию останавливали добавлением в лунки 50% раствора серной кислоты и немедленно производили измерение О.П.
при длине волны 495 нм.
За границу нормы было принято среднее арифметическое значение + 2 стандартных отклонения (M+2SD) О.П.,
полученных в группе здоровых доноров (п=20).
Исследуемые сыворотки хранили при температуре -70°С.

[Back]