|
44 Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности: 1. Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение 0,9 % раствора NaCl, из расчета 0,4 мл на 100 г) [34, 43, 44]. 2. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10*5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [34, 43, 44]. 3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек [34, 43, 44]. 4. 3 минутную гипоксию [85, 88]. 2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции1 Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [73]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл депротеинизированиой сыворотки проводили в 96 луночных планшетах с плоским дном. Чувствительность метода на приборе Labsystems Multiskan МСС/340 составляет 1,7 мкМ. Для колориметрического определения нитрит-иона использовали реактив Грисса, состоящий из равных частей раствора 1 (0,05% раствор N-нафтилэтилендиамина в воде) и раствора II (1% раствор сульфаниламида в 30% уксусной кислоте) [73]. Оба раствора хранятся в темноте при температуре 4°С в течение нескольких месяцев. Для приготовления раствора хлористого ванадия 400 мг VCb растворяли в 50 мл IN НО с последующим фильтрованием через бумажный фильтр. Всегда использовали свежеприготовленный раствор. |
1. Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение0,9 % раствора NaCl, из расчёта 0,4 мл на 100 г) [34, 43 44]. 2. Проба на адрснореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10'5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [34, 43 44]. 3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек [34, 43 44]. 4. 3 минутную гипоксию [85, 87]. 2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции 1 Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [69]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл депротеинизироваиной сыворотки проводили в 96 луночных планшетах с плоским дном. Чувствительность метода на приборе Labsystems Multiskan МСС/340 составляет 1,7 мкМ. Для колориметрического определения нитритиона использовали реактив Грисса, состоящий из равных частей раствора I (0,05% раствор N-нафтилэтилендиамина в воде) и раствора II (1% раствор сульфаниламида в 30% уксусной кислоте) [69]. Оба раствора хранятся в темноте при температуре 4°С в течение нескольких месяцев. Для приготов1 Биохимические исследования показателей Total NO и активности NOсинтазы проведены в соответствии с договором (предмет договора «Биохимическое определение маркёров функционального состояния эндотелия», № 15/12 от 27 декабря) о научно-техническом сотрудничестве между КГМУ и Государственным учреждением «Государственный Научноисследовательский центр профилактической медицины М3 РФ (ГНИЦ ИМ М3 РФ)», г. Москва на базе лаборатории под руководством профессора В А. Метельской, за что выражаем сотрудникам глубокую благодарность. 29 |