|
47 препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента, почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Рего и эозином для выявления ранних повреждений миокардиоцитов, по Ван Гизон, ставилась ШИКреакция. При морфометрии сердца использован метод раздельного взвешивания миокарда с определением индексов, определение диаметра кардиомиоцитов по методике Г.Г. Автандилова [2]. Определялись абсолютная и относительная масса надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков. Определялось соотношение интима/медиа в участках сонной артерии и брюшной аорты. 2.5. Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента Исследована эндотел иотропная активность препарата «Импаза» (сверхмалые дозы антител к эндотелиальной NO-синтазе, смесь гомеопатических разведений C12+C30+C200, производства ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг», Россия) разводили в поилках из расчёта 1 таблетка на 100 мл воды. Крысы получали импазу в свободном доступе к питью с учётом объема потребляемой жидкости 20i3 мл/жнвотное/сут., что соответствует суточной дозе. В экспериментах были исследованы следующие лекарственные препараты: «Импаза» (сверхмалые дозы антител к эндотелиальной NOсинтазе), эналаприла малеат (ингибитор ангиотензинпревращающего фермента), лозартан калия (блокатор ангиотензиновых рецепторов 1-го типа). В хронических экспериментах при моделировании L-NAMEоносредованного дефицита оксида азота все лекарственные вещества вводились в соответствующих дозах один раз в сутки в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах [207, 208, 245, 301]. |
2.4. Морфологические методы оценки сердечно-сосудистых изменений при моделировании L-NAME-нндуцироваиной ЭД2 Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и в комплексной оценке эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента), почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Рего и эозином для выявления ранних повреждений миокардиоцитов, по Ван Гизон, ставилась ШИК-реакция. При морфометрии сердца использован метод раздельного взвешивания миокарда с определением индексов, определение диаметра кардиомиоцитов по методике Г.Г. Автандилова [1]. Определялись абсолютная и относительная масса надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков. Определялось соотношение интима/медиа в участках сонной артерии и брюшной аорты. 2.5. Обоснование доз и дизайн эксперимента Согласно данным литературы, кардиотропные эффекты L-аргинина в экспериментах на крысах обнаруживаются в диапазоне доз от 10 до 600 мг/кг [123, 161, 166, 167, 208, 224]. При этом различают малые дозы 10-30 мг/кг, что соответствует суточной дозе L-аргинина в качестве БАД. Большие дозы L-аргинина используются в комплексной терапии ИБС, ХСН для коррекции эндотелиальной дисфункции и в качестве дополнительной терапии к донорам N0нитратам [20, 126, 151, 165, 168, 173, 174, 186, 187, 202, 206, 218, 227, 228]. Таким образом, описанные дозы L-аргинина 30 и 200 мг/кг использованы нами при проведении острой фармакологической пробы. “ Морфологические исследования проведены на базе морфологической лаборатории НИИ ЭМ КГМУ и патанатомического отделения Курской областной клинической больницы при консультативной и методической помощи доцента В.Т. Дудки, доцента А.В. Иванова и зав. отделением В.Г. Пирогова, за что выражаем им глубокую благодарность. 32 В хронических экспериментах при моделировании L-NAMEопосредованного дефицита оксида азота L-аргинин вводили в дозах 30 и 200 мг/кг один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах [195, 196, 221, 252]. Ингибиторы АПФ эналаприла малеат («Рениприл», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) и лозартан калия («Блоктран», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Курск) использовали в дозах 0,5 мг/кг и 6 мг/кг соответственно, что соответствует данным доступной литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препаратов в экспериментах, ранее проведённых в нашей лаборатории. Комбинированное использование L-аргинина 200 мг/кг (внутрибрюшинно), эналаприла малеата 0,5 мг/кг (внутрижелудочно) и лозартана калия 6 мг/кг (вну трижелудочно) проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 7 дней на фоне введения L-NAME. Дизайн эксперимента состоит из следующих блоков: 1. Контрольная группа. 2. Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота, острые фармакологические пробы с L-аргинином 30 и 200 мг/кг. 3. Оценка эндотелиои кардиопротективного действия L-аргинина 30 и 200 мг/кг, эналаприла 0,5 мг/кг, лозартана 6 мг/кг. 4. Оценка эффективности эндотелиои кардиопротективного действия сочетанного применения L-аргинина 200 мг/кг с эналаприлом 0,5 мг/кг и лозартаном 6 мг/кг. Протокол и дизайн эксперимента представлен на схеме 1. 33 |