|
52 Биохимические исследования показателей Total NO и активности NOсинтазы проведены в соответствии с договором (предмет договора «Биохимическое определение маркёров функционального состояния эндотелия», № 15/12 от 27 декабря) о научно-техническом сотрудничестве между КГМУ и Государственным учреждением «Государственный Научноисследовательский центр профилактической медицины М3 РФ (ГНИЦ ПМ М3 РФ)», г. Москва на базе лаборатории под руководством профессора В.А. Метельской, за что выражаем сотрудникам глубокую благодарность. ^Морфологические исследования проведены на базе морфологической лаборатории НИИ ЭМ КГ'МУ и патанатомического отделения Курской областной клинической больницы при консультативной и методической помощи доцента В.Т. Дудки, доцента Л.В. Иванова и зав. отделением В.Г. Пирогова, за что выражаем им глубокую благодарность. |
1. Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение0,9 % раствора NaCl, из расчёта 0,4 мл на 100 г) [34, 43 44]. 2. Проба на адрснореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10'5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) [34, 43 44]. 3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек [34, 43 44]. 4. 3 минутную гипоксию [85, 87]. 2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции 1 Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [69]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл депротеинизироваиной сыворотки проводили в 96 луночных планшетах с плоским дном. Чувствительность метода на приборе Labsystems Multiskan МСС/340 составляет 1,7 мкМ. Для колориметрического определения нитритиона использовали реактив Грисса, состоящий из равных частей раствора I (0,05% раствор N-нафтилэтилендиамина в воде) и раствора II (1% раствор сульфаниламида в 30% уксусной кислоте) [69]. Оба раствора хранятся в темноте при температуре 4°С в течение нескольких месяцев. Для приготов1 Биохимические исследования показателей Total NO и активности NOсинтазы проведены в соответствии с договором (предмет договора «Биохимическое определение маркёров функционального состояния эндотелия», № 15/12 от 27 декабря) о научно-техническом сотрудничестве между КГМУ и Государственным учреждением «Государственный Научноисследовательский центр профилактической медицины М3 РФ (ГНИЦ ИМ М3 РФ)», г. Москва на базе лаборатории под руководством профессора В А. Метельской, за что выражаем сотрудникам глубокую благодарность. 29 2.4. Морфологические методы оценки сердечно-сосудистых изменений при моделировании L-NAME-нндуцироваиной ЭД2 Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и в комплексной оценке эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента), почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Рего и эозином для выявления ранних повреждений миокардиоцитов, по Ван Гизон, ставилась ШИК-реакция. При морфометрии сердца использован метод раздельного взвешивания миокарда с определением индексов, определение диаметра кардиомиоцитов по методике Г.Г. Автандилова [1]. Определялись абсолютная и относительная масса надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков. Определялось соотношение интима/медиа в участках сонной артерии и брюшной аорты. 2.5. Обоснование доз и дизайн эксперимента Согласно данным литературы, кардиотропные эффекты L-аргинина в экспериментах на крысах обнаруживаются в диапазоне доз от 10 до 600 мг/кг [123, 161, 166, 167, 208, 224]. При этом различают малые дозы 10-30 мг/кг, что соответствует суточной дозе L-аргинина в качестве БАД. Большие дозы L-аргинина используются в комплексной терапии ИБС, ХСН для коррекции эндотелиальной дисфункции и в качестве дополнительной терапии к донорам N0нитратам [20, 126, 151, 165, 168, 173, 174, 186, 187, 202, 206, 218, 227, 228]. Таким образом, описанные дозы L-аргинина 30 и 200 мг/кг использованы нами при проведении острой фармакологической пробы. “ Морфологические исследования проведены на базе морфологической лаборатории НИИ ЭМ КГМУ и патанатомического отделения Курской областной клинической больницы при консультативной и методической помощи доцента В.Т. Дудки, доцента А.В. Иванова и зав. отделением В.Г. Пирогова, за что выражаем им глубокую благодарность. 32 |