8 4 Проведена оценка липидного обмена аполипонротеина А и В (Апо Aj, Апо В), количественное определение фибриногена в плазме крови проводили на коагулометре Solar. Концентрацию глюкозы в плазме определяли утром натощак и через 2 часа после углеводной нагрузки (75 г глюкозы в 200 мл воды). После забора кровь в стеклянном капилляре центрифугировали, вносили в реакционную кювету и определяли концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом на Анализаторе Глюкозы 2 фирмы Beckman (США), с применением наборов фирмы BioSystems. Количественное определение содержания фибриногена в плазме крови проводили на коагулометре Solar, хронометрический метод по Clauss, контрольные плазмы “Технология стандарт”. С реактивный белок сыворотки (СРВ) определяли методом «высокочувствительный латекс», турбидиметрически. 2.3.2. Иммунологические исследования Для определения концентрации в плазме крови таких растворимых молекул, как: — инсулин, — фактор некроза опухоли-а (TNF-a), — интерлейкин-6 (IL-6), — эндотелии-1 (ЕТ-1) — ингибитор активатора плазминогена (PAI-1) использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа, проведенный на биохимическом анализаторе “Multiscan” производства ThermoLabSystems (США) с наборами соответствующих реактивов (Bender MedSystems и DRG). При хранении биологического материала более 24 часов, для предотвращения потери активности гормонов и цитокинов использовалась температура -70°С. 2.3.3. Метаболиты оксида азота Для изучения метаболизма оксида азота исследовали концентрацию стабильных метаболитов оксида азота (NO2 и NO3) в сыворотке крови, спектрофотометрическим методом с применением реактива Гриса. |
61 Критерии наличия РНУО Концентрацию глюкозы в плазме определяли утром натощак и через 2 часа после углеводного завтрака (75 г глюкозы в 200 мл воды). После забора кровь в стеклянном капилляре центрифугировали, вносили в реакционную кювету и определяли концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом на Анализаторе Глюкозы 2 фирмы Beckman (США). нарушение гликемии натощак (НГН) глюкоза в плазме крови натощак 5,6-6,1 ммоль/л; и/или нарушение толерантности к глюкозе (НТГ) глюкоза в плазме крови через 2 часа после нагрузки глюкозой в пределах >7,8 и <11,1 ммоль/л. Критерии наличия НАЖБП Ультразвуковые критерии стеатоза печени (Accuvix V20 Prestige) более чем 10% содержание в печени ТГ относительно сухой массы, в сочетании с: дистальное затухание эхосигнала; диффузная гиперэхогенность паренхимы печени; увеличение эхогенности печени по сравнению с почками; нечеткость сосудистого рисунка. Критерии НАЖБП в стадии НАСГ Повышение концентрации трансаминаз (АЛТ, ACT, ШФ, ГГТП) более чем в 2 раза от уровня, рекомендованного для практически здоровых лиц, рассматривалось нами как маркер наличия неалкогольного стеатогеиатита. Биохимические маркеры воспаления и активации эндотелия Для определения концентрации в плазме крови таких растворимых молекул, как: инсулин; фактор некроза опухоли-а (TNF-a); интерлейкин-6 (IL-6); эндотелии-1 (ЕТ-1). 62 Использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа, проведенный на биохимическом анализаторе “Multiscan” производства ThermoLabSystems (США) с наборами соответствующих реактивов (Bender MedSystems и DRG). При хранении биологического материала более 24 часов, для предотвращения потери активности гормонов и цитокинов использовалась температура -70 °С. Эндотел ин-зависимая вазодилятация Эндотелий-зависимая вазодилятация оценивалась по параметрам исследования плечевой артерии (Acuson «Sequoia-512», USA) с помощью линейного датчика с частотой 7 МГц, направление плоскости сканирования было строго перпендикулярно продольной оси сосуда и сосудистой стенки, за нормальные значения принимали показатели прироста дилатации артерии, после компрессии на 10 % и более. Определение выраженности фиброза печени Эластометрия Fibroscan (Echosens, Франция), измеряемый объем печени в 200-300 раз больше, чем объем образца биоптата. Выполнялось 10 измерений на глубине 25-65 мм от поверхности кожи. Генерируемые ультразвуковым преобразовательным датчиком колебания передаются на подлежащие исследуемые ткани печени и создают упругие волны. Скорость распространения упругих волн определяется эластичностью печеночной ткани и позволяет выявить ранние стадии формирования фиброза. Морфологическая оценка стадии фиброза оценивалась по системе «METAVIR»: F0 отсутствие фиброза; F1 портальный фиброз без септ; F2 портальный фиброз в сочетании с единичными септами; F3 портальный фиброз в сочетании с множественными септами, без ложных долек; F4 цирроз печени. |