|
п. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ L Материалы и методы Работа выполнена в Научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина в период 1999-2004 г.г. Опыты по изучению эффективности препарата при лечении паразитозов животных проводили в хозяйствах Рязанской области и Республики Калмыкия. При изучении вопросов, связанных с оптимизацией условий биосинтеза, продуцент авермектинов Streptomyces avermitilis-56 культивировали в глубинных условиях, в качалочных колбах при вращении 220-240 об/мин., а также в колбах объемом 2500 мл поверхностно на увлажненном пшене при температуре 28°С. Количество авермектинов определяли спектрофотометрически на СФ 46 при 243246нм и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в режимах: 246 нм, микроколонка, носитель ацетонитрилметанол. В динамике развития продуцента авермектинов контролировали рН культуральной жидкости, накопление биомассы и целевого продукта. Количество биомассы определяли весовым методом путем высушивания ее в сушильном шкафу при температуре 105°С, чистоту культуры в процессе культивирования контролировали путем микроскопирования образцов культуральной жидкости (КЖ) и высевом в МПБ и на МПА. Авермектиновый комплекс из биомассы извлекали путем 3" кратной экстракции этиловым или изопропиловым спиртом, сопутствующие липиды осаждали вымораживанием при -20°С в течение 12-16 часов. В экстракте определяли содержание авермектинов и на вакуумвыпарной установке концентрировали до необходимого значения (1-2%). Полученное таким образом действующее вещество (комплекс натуральных авермектинов), а также биомассу продуцента с известным количеством действующего веществ (ДВ), вводили в состав препарата. При исследовании параметров токсичности препарата опыты проводили на беспородных белых мышах массой 16-23 г и кроликах 33 |
39 П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Материалы и методы Работа была выполнена в Научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина в период 1997-2001 г.г. Опыты по изучению эффективности препарата при лечении паразитозов животных проводили в клиниках г. Москвы и в питомнике научно-исследовательского института микробиологии МО РФ г. Кирова. Объектами исследований служили микроорганизм 81гер1отусе8 ауегт111И8-56, подопытные животные белые беспородные мыши, крысы, кролики, золотистые хомячки, кролики, собаки, кошки, свиньи и др. При отработке оптимального режима культивирования продуцент авермектинов 81гер1отусе8 ауеппкШз-Зб культивировали в глубинных условиях в качалочных колбах при скорости вращения 220-240 об/мин. и ферментерах объемом 250 л при температуре 28° С и аэрации 0,8-1,0 об./об. Воздуха в мин., начальное значение рН -7,0-7,2. Количество авермектинов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в режимах: 246 им, микроколонка, носитель ацетонитрил-метанол. В отдельных опытах содержание авермектинов в биопробах контролировали биологическим методом с помощью тест объектов (олигохеты-сем. ТиЬ1йс1(1ае) и спектрофотометрически на СФ46 при 243-246 нм. Характер развития продуцента авермектинов контролировали по изменению рН культуральной жидкости, накоплению биомассы и биосинтезу целевого продукта. Количество биомассы определяли весовым методом путем высушивания ее в сушильном шкафу при температуре 105° С, чистоту культуры в процессе культивирования контролировали путем микроскопирования образцов культуральной жидкости (КЖ) и высевом в МПБ и на МП А. Путем оптимизации технологии получения опытных образцов гранул, |