|
городских и районных больницах, поликлиниках, роддомах, учреждениях санэпиднадзора и других медучреждениях. Исследование проводилось во всех исследуемых группах больных в два этапа. 1. Подготовка исследуемого образца. Для проведения исследования использовали абсолютно свежие (не более 2-3 суток хранения), чистые с поверхности куриные яйца средней величины (нормативная масса яйца —около 47 г). Яйца мыли водой, погружали в кипящую воду на срок не более 60 секунд и аккуратно разбивали в стакан. При этом внутреннее содержимое яйца оставалось жидким. Белок отделяли от желтков и давали его выпить больному (утром, натощак). На протяжении последующих 3 часов больной не принимал пищу. В связи с исследованием малых концентраций антигена и предотвращения экзогенного загрязнения проб антигенным материалом, отбор крови проводили в отдельном помещении, что исключило контакт посуды и оборудования для взятия крови с материалом куриных яиц. По истечении этого времени из вены брали, в чистую сухую стерильную пробирку (стерилизация в сухожаровом шкафу при 150-160С0), 10-12 мл крови После отбора образца кровь в пробирке оставляли на 30-60 мин для коагуляции, затем обводили сгусток по периметру пробирки чистой сухой спицеи из нержавеющей стали предварительно прокаленной над открытым огнём и охлаждённой на воздухе. После этого оставляли образец в холодильнике на 3-4 часа. После оседания сгустка аккуратно сливали сыворотку в чистую одноразовую полистирольную пробирку. При наличии в пробе эритроцитов, её центрифугировали на лабораторной центрифуге в течение 5-7 минут при 1500 об/мин. Общий объём сыворотки в образце был как минимум 3 мл (НИИ Питания РАМН, Москва). Образцы хранили в морозильной камере при температуре -20С Повторное, многократное замораживание проб не допускали. о |
является наиболее часто используемым иммунологическим методом в городских и районных больницах, поликлиниках, роддомах, учреждениях санэпиднадзора и других медучреждениях. Исследование проводилось у всех больных перенёсших ПСГТДР, МРПЖ и малоинвазивное вмешательство на поджелудочной железе в два этапа. 1) Подготовка исследуемого образца. Для проведения исследования использовали абсолютно свежие (не более 2-3 суток хранения), чистые с поверхности куриные яйца средней величины (нормативная масса яйца около 47 г). Яйца мыли водойз погружали в кипящую воду на срок не более 60 секунд и аккуратно разбивали в стакан. При этом внутреннее содержимое яйца оставалось жидким. Белок отделяли от желтков и давали его выпить больному (утром, натощак). На протяжении последующих 3 часов больной не принимал пищу. В связи с исследованием малых концентраций антигена и предотвращения экзогенного загрязнения проб антигенным материалом, отбор крови проводили в отдельном помещении, что исключило контакт посуды и оборудования для взятия крови с материалом куриных яиц. По истечении этого времени из вены брали, в чистую сухую стерильную пробирку (стерилизация в сухожаровом шкафу при 150-160С0), 10-12 мл крови. После отбора образца кровь в пробирке оставляли на 30-60 мин для коагуляции, затем обводили сгусток по периметру пробирки чистой сухой спицеи из нержавеющей стали предварительно прокаленной над открытым огнём и охлаждённой на воздухе. После этого оставляли образец в холодильнике на 3-4 часа. После оседания сгустка аккуратно сливали сыворотку в чистую одноразовую полистирольную пробирку. При наличии в пробе эритроцитов, её центрифугировали на лабораторной центрифуге в течение 5-7 минут при 1500 об/мин. Общий объём сыворотки в образце был как минимум 3 мл. оОбразцы хранили в морозильной камере при температуре -20С Повторное, многократное замораживание проб не допускали. Особое внимание при подготовке образца уделяли факторам, препятствующим количественному определению овальбумина в крови: 1)Гемолиз крови при отборе образца (получаемая сыворотка должна быть светло или интенсивно желтого цвета, прозрачной) 2) Высокое содержание липопротеидов (т.н. “postprandial55 сыворотка исследование натощак) 3)Бактериальное обсеменение образца (соблюдение асептических условий при заборе и правильное хранение образцов) 4) Наличие у больного высоких титров антител к овальбумину (при аллергии к яйцам, и аутоиммунных процессах) 5) Загрязнение пробы «внешним» овальбумином. 3) Количественное определение концентрации овальбумина методом двухвалентного твердофазного иммуноферментного анализа. Выполняли при помощи тест-системы иммуноферментной для определения овальбумина [Регистр лекарственных средств России (РЛС), набор диагностический № 92/132/17]. Принцип метода основан на иммуноферментном определении в сыворотке крови концентрации антигена куриных яиц овальбумина через 3 часа после пищевой нагрузки двумя и 55 белками куриных яиц. Принципиальная схема работы иммуноферментной тест системы для количественного определения овальбумина куриного яйца в сыворотке крови, приведена ниже. Рис. 2.4. 1стадия ИФА |