|
Модель эксперимента Таблица 1 Распределение экспериментальных животных в эксперименте Виды воздействия Количество животных, используемых в эксперименте 1. Интактные животные 3 2. В/В введение кетонала * 12 3. Э/Л введение кетонала * 14 4.В/В введение кетонала в условиях экспе# риментального воспаления 13 5.Э/Л введение кетонала в условиях экспе11 риментального воспаления Модель экспериментального воспаления в данной работе достигалась следующим образом: интактным крысам в десневой карман вводили 0,05 мкл альфа-токсина, а через 48 часов —20x109тел золотистого стафилококка. Животных выводили из эксперимента путем передозировки наркотического вещества. Инфицирование животных и забор биологического материала производили в одно время суток, чтобы избежать влияния циркадных суточных изменений, имеющих место в лимфоидной ткани (Смирнова Т.С. и соавт., 1988; Катинас Г.С. и соавт., 1981) в осенний период. Используемые материал и методы Кетонал как НСПВП относится к производным пропионовой кислоты. Обладает мощным периферическим анальгетическим эффектом и некоторым центральным воздействием. Оказывает также противовоспалительное и жаропонижающее действие, подавляет агрегацию тромбоцитов. Механизм действия связан с ингибированием синтеза простагландинов, лейкотриенов и тромбоксанов на уровне циклооксигензы и липооксигеназы. После перорального приема быстро и полно всасывается из ЖКТ, хорошо проникает в соединительную ткань и синовиальную жидкость. Период полу |
Глава И. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Экспериментально-морфологические методы исследования. 2.1.1. Лимфотропная антибиотикотерапия. Метод введения кетонапа. С целью изучения эффективности Кетонала (Кетопрофена), после внутривенного и лимфотропного введения в ткани десны в условиях воспаления, проведено экспериментальное исследование на белых крысах линии Wistar массой от 150 до 180 г. обоего пола, в возрасте 6-9 месяцев. Животные содержались с учетом хронобиологии и хрономедицины (Комаров Ф.И., 1989). Кетонал как неспецифический противовоспалительный препарат (НСПВП) относится к производным пропионовой кислоты. Обладает мощным периферическим анальгетическим эффектом и некоторым центральным воздействием. Также оказывает противовоспалительное и жаропонижающее действие, подавляет аггрегацию тромбоцитов. После перорального приема быстро и полно всасывается из ЖКТ, хорошо проникает в соединительную ткань и синовиальную жидкость. Период полувыведения колеблется от 1,6 до 1,9 часов. При применении кетопрофена маловероятно развитие побочных эффектов из-за кумуляции препарата и продуктов его распада (быстрое и достаточно полное его выведение). Активное вещество: кетопрофен. Химическое название: м бензоилгидратропная кислота 2-(3-бензоилфенил) пропионовая кислота. Формула: С^Н^Оз. Молекулярный вес: 254.24. PH раствора: 6,5-7,5. Изучение влияния кетонала мы попытались провести опосредованно, исходя из механизмов его действия, связанных с ингибированием синтеза простагландинов, лейкотриенов и тромбоксанов. Таким образом, одним из ключевых ферментов, через которые простагландины Е осуществляют воздействие на ткани организма, является аденилатциклаза (АЦ) и, что для нас особенно важно, эта возможность ее обнаружения в клетках фибробластического ряда. Модель экспериментального воспаления в данной работе достигалась следующим образом: интактным крысам в десневой карман вводили 0,05мкл альфа-токсина, а через 48 часов 20Т09 тел золотистого стафиллококка. Инфицированных животных и забор биологического материала производителями в одно время суток, чтобы избежать влияния циркадных суточных изменений, имеющих место в лимфоидной ткани (Смирнова Т.С. и соавт., 1988). В настоящем исследовании мы применяли кетонал в ампулах для в/в введения в дозе 100 мг (2 мл). Экспериментальным животным введение лекарственного препарата осуществляли однократно при в/в введении в хвостовую вену, при л/т введении на границе верхней и средней трети бедра по его медиальной поверхности, после чего проводили ручной лимфомассаж в течение 15 минут. Вводимая доза препарата была рассчитана из применяемой в клинике и составила 1,5 мг/кг массы тела животного. Указанную дозу разводили в 2 мл теплого физиологического раствора. Как при в/в, так и л/т методах введения, их осуществляли через механический дозатор в течение 30 минут, т.е. практически капельно. Эфтаназию животных осуществляли передозировкой наркотического вещества нембутала. Забор материала производили через 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36, 48 часов с целью исследования аденилатциклазы (АЦ) в фибробластах соединительной ткани десны, где данные клеточные элементы встречаются наиболее часто. АЦ, которая в обилие регистрируется в зоне гранулярной эндоплазматической сети клеток фибробластического ряда представляет из себя циклический аденозин-3',5' монофосфат, который играет важную роль в ме нейно зависеть от количества выявляемого вещества (стехеометричность связывания красителя). Фотометрирование для количественного определения обычно проводят при длине волны, при которой поглощение света продуктом реакции максимально. Максимум поглощения для этой реакции был при 540 нм. Измерение содержания АЦ осуществляется с помощью определения поглощения (экстинкции) в окрашенных участках клетки (метод зонда). Произвольные единицы вычисляются на основе данных по среднему оптическому поглощению и площади окрашенного участка. Для количественного определения относительной оптической плотности конечного продукта реакции при выявлении активности АЦ срезы десны контрольного и опытного животных цитофотометрировали на микроскопе ЛЮМАМ-ИЗ с фотометрической насадкой. Измерения производили зондом, диаметром 0,5 мкм, в монохроматическом луче света с длиной волны 540 нм. Подсчет прореагировавших клеток проводили в 10 полях зрения при увеличении объектива *40. Таким образом, нами были получены данные о светооптической плотности АЦ в клетках фибробластического ряда в сравнении с нормальными показателями, которые мы исследовали у контрольных животных. В процессе работы нами проведено исследование у 5 групп животных (табл. 1). Таблица 1. Распределение экспериментальных животных в эксперименте. Виды воздействия Количество животных, используемых в эксперименте 1. Интактные животные 3 2. В/В введение кетонала 12 3. Л/Т введение кетонала 14 4. В/В введение кетонала в условиях экспериментального воспаления 13 5. Л/Т введение кетонала в условиях экспериментального воспаления 11 |