|
ЛЮМАМ-ИЗ с фотометрической насадкой. Измерения производили зондом, диаметром 0,5 мкм, в монохроматическом луче света с длиной волны 540 нм. Подсчет прореагировавших клеток проводили в 10 полях зрения при увеличении объектива *40. Таким образом, нами были получены данные о светооптической плотности АЦ в клетках фибробластического ряда в сравнении с нормальными показателями, которые мы исследовали у контрольных животных. Всего в процессе работы нами проведено исследование у 5 групп животных. В 4 и 5 группах в результате передозировки наркотического препарата погибли 2 крысы до момента начала эксперимента. 2.1.2. Методы электронной микроскопии В настоящее время сканирующая электронная микроскопия, на наш взгляд, является наиболее адекватной методикой морфологического исследования, поскольку на одном и том же препарате возможно исследование всех его конструктивных характеристик в широком диапазоне увеличения и на больших площадях. Для морфологического исследования мы использовали методику сканирующей электронной микроскопии нативных препаратов (СЭМНП). Для приготовления нативных препаратов лимфатические узлы отмывали от крови с помощью гепаринизированной среды 199 (ретроградная перфузия через брюшную аорту) и фиксировали перфузией 2,5% раствором глутарового альдегида на среде 199, дофиксировали в том же фиксаторе, обрабатывали 1% раствором осьмиевой кислоты, обезвоживали в этаноле восходящей концентрации. Из 96% этанола образцы замораживали в жидком азоте и раскалывали. После оттаивания в 96% этаноле процесс обезвоживания продолжался, препараты высушивали путем перехода через критическую точку в С02и напыляли золотом или платиной. В ряде случаев раскалывания образцов не проводили, а исследовали препараты, резаные свежим лезвием бритвы после дофиксации. |
нейно зависеть от количества выявляемого вещества (стехеометричность связывания красителя). Фотометрирование для количественного определения обычно проводят при длине волны, при которой поглощение света продуктом реакции максимально. Максимум поглощения для этой реакции был при 540 нм. Измерение содержания АЦ осуществляется с помощью определения поглощения (экстинкции) в окрашенных участках клетки (метод зонда). Произвольные единицы вычисляются на основе данных по среднему оптическому поглощению и площади окрашенного участка. Для количественного определения относительной оптической плотности конечного продукта реакции при выявлении активности АЦ срезы десны контрольного и опытного животных цитофотометрировали на микроскопе ЛЮМАМ-ИЗ с фотометрической насадкой. Измерения производили зондом, диаметром 0,5 мкм, в монохроматическом луче света с длиной волны 540 нм. Подсчет прореагировавших клеток проводили в 10 полях зрения при увеличении объектива *40. Таким образом, нами были получены данные о светооптической плотности АЦ в клетках фибробластического ряда в сравнении с нормальными показателями, которые мы исследовали у контрольных животных. В процессе работы нами проведено исследование у 5 групп животных (табл. 1). Таблица 1. Распределение экспериментальных животных в эксперименте. Виды воздействия Количество животных, используемых в эксперименте 1. Интактные животные 3 2. В/В введение кетонала 12 3. Л/Т введение кетонала 14 4. В/В введение кетонала в условиях экспериментального воспаления 13 5. Л/Т введение кетонала в условиях экспериментального воспаления 11 В 4 и 5 группах в результате передозировки наркотического препарата погибли 2 крысы до момента начала эксперимента. 2.1.2. Методы электронной микроскопии. В настоящее время сканирующая электронная микроскопия, на наш взгляд, является наиболее адекватной методикой морфологического исследования, поскольку на одном и том же препарате возможно исследование всех его конструктивных характеристик в широком диапазоне увеличения и на больших площадях. Для морфологического исследования мы использовали методику сканирующей электронной микроскопии нативных препаратов (СЭМНП). Для приготовления нативных препаратов лимфатические узлы отмывали от крови с помощью гепаринизированной среды 199 (ретроградная перфузия через брюшную аорту) и фиксировали перфузией 2,5% раствором глутарового альдегида на среде 199, дофиксировали в том же фиксаторе, обрабатывали 1% раствором осьмиевой кислоты, обезвоживали в этаноле восходящей концентрации. Из 96% этанола образцы замораживали в жидком азоте и раскалывали. После оттаивания в 96% этаноле процесс обезвоживания продолжался, препараты высушивали путем перехода через критическую точку в С02 и напыляли золотом или платиной. В ряде случаев раскалывания образцов не проводили, а исследовали препараты, резаные свежим лезвием бритвы после дофиксации. Анализ нативных препаратов проводили в сканирующем электронном микроскопе Philips Р8ЕМ-500х со съемкой на коммерческую широко-и узкоформатную пленку. 2.1.3. Методы гистологического исследования. Для изучения морфологической структуры исследуемых объектов нами использовались также гистологические методы исследования. Поскольку методики приготовления гистологических препаратов общеизвестны и широко используются, остановимся лишь ни их кратком изложении. Ку |