|
31 дифференциально-диагностические и элективные среды Эндо, Плоскирева, Сабуро, Блаурокка. При этом учитывали общее количество бактерий: 1) лактобацилл; 2) бифидобактерий: 3) микробов семейства Enterohacteriaccae\ 4) стафилококков; 5) стрептококков; 7) дрожжеподобных грибов. Таксономическую принадлежность изолированных микроорганизмов оценивали на основании изучения их морфологических, тинкториальных свойств, способности к росту в аэробных и/или анаэробных условиях, характеру роста на селективных средах, а также по биохимическим и антигенным свойствам. Количество микроорганизмов (КОЕ/г) каждого рода подсчитывали по формуле: для плотных сред: X = 20 •х ► п •к, для жидких сред X = 2 •х •к где X количество микроорганизмов каждого рода (КОЕ/г), п количество выросших колоний, к —разведение, из которого произведен посев с обратным знаком степени. Фекалии для исследования доставлялся без консерванта не позже 2 часов с момента отбора. Материал, доставляемый в более поздние сроки, сохраняли не более 4 часов при температуре Н-4 +6° С. Материал отбирали в предварительно взвешенные флаконы в количестве 0,5-1,0 г, после повторного взвешивания устанавливали вес пробы и добавляли изотонический раствор хлорида натрия, чтобы получить разведение 10*5 . Путем последовательных разведений из основного готовили разведение 10'3,10’5, 10’7, 10'9отдельными стерильными пинетками. Обнаружение бифидобактерий проводили на регенерированных средах: Блаурокка, «для контроля стерильности» и гидролизатпомолочную среду. Посевная доза 1 мл из разведений 10"7, 10'8 и 10‘9. Из пробирок, в которых обнаружен рост, готовили мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали. |
50 посевом в каждую пробирку добавляли 1-2 петли мелкого стерильного рисового крахмала. В двухфазной яичной среде Циерта в качестве твердой фазы использовали коагулированное в скошенном положении содержимое куриного яйца. Жидкая фаза представляла собой раствор Хенкса или Среду / 199 с добавлением сыворотки крови кур, крупного рогатого скота, лошади. Анаэробные условия достигались путем наслаивания на среду 1-2 мл стерильного масла, pH среды 7,0-7,2. Аксеничность среды достигвется путем добавления на 1 мл среды 4 тыс. ЕД. ампециллииа, 1 тыс. ЕД. срептомицинна J и 500 мг амфотерицина. Среда Суреша содержала экстракт дрожжей, однозамещенный фосфорнокислый калий и двузамещенный фосфорнокислый калий. В случае, необходимости длительного культивирования в среду вносили полную бактериологическую петлю культуры Proteus vulgaris, выращенную на скошенном мясопегтгопном агаре при температуре 37° С (Suresh et al., 1993). 5.2.2. Методы изучения бактериальной флоры кишечника Изучение микробного состава кишечника проводили согласно Приказу № 535 от 22.04.1985 М3 РСФСР «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях и лечебно-профилактических учреждениях». При этом определяли качественный и количественный состав микрофлоры кишечника в пересчете на 1 г фекалий. Посев фекалий осуществляли на дифференциально-диагностические и элективные среды: Эндо, Плоскирева, Сабуро, Блаурокка. При этом учитывали общее количество бактерий семейства Enterobacteriaceae, лактобацилл, бифидобактерий, стафилококков, стрептококков и дрожжеподобных грибов. Таксономическую принадлежность изолированных микроорганизмов оценивали на основании изучения их морфологических, тинкториальных свойств, способности к росту в аэробных и/или анаэробных условиях, характеру роста на селективных средах, а также по биохимическим и антигенным свойствам. Количество микроорганизмов (КОБ/г) каждого рода подсчитывали по формуле: для плотных сред: X = 20 • х •п •к, для жидких сред X = 2 •х •к где X количество микроорганизмов каждого рода (КОЕ/г), п количество выросших колоний, к разведение, из которого произведен посев с обратным знаком степени. Фекалии для исследования доставляли без консерванта не позже 2 часов с момента отбора. Материал, доставляемый в более поздние сроки, сохраняли не более 4 часов при температуре +4 +6° С. Материал отбирали в предварительно взвешенные флаконы в количестве 0,5-1,0 г, после повторного взвешивания устанавливали вес пробы и добавляли изотонический раствор хлорида натрия, чтобы получить разведение 10'1. Путем последовательных разведений из основного готовили разведение 10°, 105,10'7, 10'9отдельными стерильными пипетками. Обнаружение бифидобактерий проводили на регенерированных средах: Блаурокка, «для контроля стерильности» и гидролизатномолочную среду. Посевная доза 1 мл из разведений 10'7, 10‘8 и КГ9. Из пробирок, в которых обнаружен рост, готовили мазки, окрашивали по Граму и микроекопировати. Количество бактероидов определяли на кровяном агаре Хенеля. Подсчитывали колонии, содержащие бесспоровые грамотрицательные палочки, не растущие в аэробных условиях. Количество лактобацил и молочнокислых стрептококков определяли на плотной среде МРС-2 или МРС-4. Из разведений 10'5-10‘7 по 0,05 мл засевали на среды Калины, ДИФ-4 для выделения и количественного учета энтерококков. Рост стафилакокков учитывали на ЖСА. На среде Сабуро определяли наличие г " \ / |