|
32 Количество бактероидов определяли на кровяном агаре Хенеля. Подсчитывали колонии, содержащие бесспоровые грамотринательные палочки, не растущие в аэробных условиях. Количество лактобацил и молочнокислых стрептококков определяли на плотной среде МРС-2 или МРС-4. Из разведений 10'5-10‘7 по 0,05 мл засевали на среды Калины, ДИФ-4 для выделения и количественного учёта энтерококков. Рост стафилакокков учитывали на ЖСА. На среде Сабуро определяли наличие грибов рода Кандида. Готовили нативные и окрашенные по Граму препараты, просматривали под микроскопом, далее пересевали в пробирки со скошенной средой Сабуро и инкубировали при температуре 28 30 С0 двое суток, затем определяли чистую культуру. Для выявления микробов кишечного семейства материал засевали на среды: Эндо, Левина и Плоскирсва без антибиотиков. Наличие клостридий учитывали на среде Вильсон-Блера по почернению и разрывам среды. На 5 % кровяном агаре изучали гемолитические формы микрофлоры. Диагноз кишечного дисбактериоза устанавливался только в случае резкого снижения в испражнениях популяции бифидобактерий до 107 КОЕ/г и меньше, лактобатерий до 105 КОЕ/г и меньше, эшерихий до 10б и меньше при одновременном увеличении численности популяции одного и более условно-патогенных микробов: стафилококков, протей, клебсиелл и др. до 104 КОЕ/г и больше, дрожжеподобных грибов до 104 КОЕ/г и больше, а также по появлению атипичных форм эшерихий до 10 % и более. |
изучения их морфологических, тинкториальных свойств, способности к росту в аэробных и/или анаэробных условиях, характеру роста на селективных средах, а также по биохимическим и антигенным свойствам. Количество микроорганизмов (КОБ/г) каждого рода подсчитывали по формуле: для плотных сред: X = 20 • х •п •к, для жидких сред X = 2 •х •к где X количество микроорганизмов каждого рода (КОЕ/г), п количество выросших колоний, к разведение, из которого произведен посев с обратным знаком степени. Фекалии для исследования доставляли без консерванта не позже 2 часов с момента отбора. Материал, доставляемый в более поздние сроки, сохраняли не более 4 часов при температуре +4 +6° С. Материал отбирали в предварительно взвешенные флаконы в количестве 0,5-1,0 г, после повторного взвешивания устанавливали вес пробы и добавляли изотонический раствор хлорида натрия, чтобы получить разведение 10'1. Путем последовательных разведений из основного готовили разведение 10°, 105,10'7, 10'9отдельными стерильными пипетками. Обнаружение бифидобактерий проводили на регенерированных средах: Блаурокка, «для контроля стерильности» и гидролизатномолочную среду. Посевная доза 1 мл из разведений 10'7, 10‘8 и КГ9. Из пробирок, в которых обнаружен рост, готовили мазки, окрашивали по Граму и микроекопировати. Количество бактероидов определяли на кровяном агаре Хенеля. Подсчитывали колонии, содержащие бесспоровые грамотрицательные палочки, не растущие в аэробных условиях. Количество лактобацил и молочнокислых стрептококков определяли на плотной среде МРС-2 или МРС-4. Из разведений 10'5-10‘7 по 0,05 мл засевали на среды Калины, ДИФ-4 для выделения и количественного учета энтерококков. Рост стафилакокков учитывали на ЖСА. На среде Сабуро определяли наличие г " \ / грибов рода Candida. Готовили нативные и окрашенные по Граму препараты, просматривали под микроскопом, далее пересевали на пробирки со скошенной средой Сабуро и инкубировали при температуре 28° 30° С двое суток, затем определяли чистую культуру. Для выявления микробов кишечного семейства материал засевали на среды: Эндо, Левина и Плоскирева без антибиотиков. Наличие клостридий учитывали на среде Вильсон-Блера по почернению и разрывам среды. На 5 % кровяном агаре изучали гемолитические формы микрофлоры. Диагноз кишечного дисбактериоза устанавливался только в случае резкого снижения в испражнениях популяции бифидобактерий до 107 КОЕ/г и меньше, лактобатерий до 105 КОЕ/r и меньше, эшерихий до 106 и меньше при одновременном увеличении численности популяции одного и более условно-патогенных микробов: стафилококков, протей, кпебсиелл и др. до 101 КОЕ/г и больше, дрожжеподобных грибов до 104 КОЕ/г и больше, а также по появлению атипичных форм эшерихий до 10 % и более. Для оценки микробиоценоза использовали метод количественного выделения вариантов микроорганизмов, входящих в состав микробиоценоза (Тец, 1997). При определении доли участия разных групп микроорганизмов в структуре микробиоценоза использовали показатель постоянства (Уиттекер, 1980). 5.2.3. Методы изучения протоценоза 5.2.З.1. Консервирование материала Свежие фекалии (3 г) помещали во флакон с консервирующей жидкостью в соотношении 1 : 3 и тщательно размешивали до получения гомогенной суспензии. Затем полученную суспензию помещали во флакон и плотно его закрывали. В качестве консервирующей жидкости использовали консервант Турдыева, который включает 0,2 % водный раствор |