|
35 гомогенной суспензии. Затем полученную суспензию помещали во флакон и плотно его закрывали. В качестве консервирующей жидкости использовали консервант Турдыева, который включает 0,2 % водный раствор азотистокислого натрия 80 мл, концентрированного формалина 10 мл, концентрированного раствора Люголя (4 г йодистого калия, 100 мл дистиллированной воды, 2 г кристаллического йода) 8 мл, глицерина 2 мл (Гснис, 1979). 4.2,4.2. Метод обогащения материала Для повышения эффективности обнаружения простейших, фекалии, помещенные в консервант, концентрировали методом формалино-эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена Ридли (Сахарова, 1997). Для этого пипеткой 2 3 мл отстоявшейся суспензии переносили в центрифужную пробирку, доливали 10 % раствор формалина до 6 7 мл, затем 2 3 мл эфира. Далее пробирку закрывали резиновой пробкой, энергично встряхивали в течение 30 секунд и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2-3 минут. После этого надосадочную жидкость и фекальную пробку удаляли, осадок использовали для микроскопии. 4.2.4.3. Микроскопия препаратов Выявление лямблий в препаратах проводили путем микроскопии нативных или окрашенных мазков, либо после формалино-эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли. Размеры лямблий определяли при помощи окулярмикрометра. Для приготовления нативного препарата на предметное ст екло пипеткой наносили каплю физраствора или раствора Люголя, в котором эмульгировали биологический материал. Далее мазок накрывали покровным стеклом. При необходимости с целью предотвращения высыхания препарата покровное стекло окантовывали |
грибов рода Candida. Готовили нативные и окрашенные по Граму препараты, просматривали под микроскопом, далее пересевали на пробирки со скошенной средой Сабуро и инкубировали при температуре 28° 30° С двое суток, затем определяли чистую культуру. Для выявления микробов кишечного семейства материал засевали на среды: Эндо, Левина и Плоскирева без антибиотиков. Наличие клостридий учитывали на среде Вильсон-Блера по почернению и разрывам среды. На 5 % кровяном агаре изучали гемолитические формы микрофлоры. Диагноз кишечного дисбактериоза устанавливался только в случае резкого снижения в испражнениях популяции бифидобактерий до 107 КОЕ/г и меньше, лактобатерий до 105 КОЕ/r и меньше, эшерихий до 106 и меньше при одновременном увеличении численности популяции одного и более условно-патогенных микробов: стафилококков, протей, кпебсиелл и др. до 101 КОЕ/г и больше, дрожжеподобных грибов до 104 КОЕ/г и больше, а также по появлению атипичных форм эшерихий до 10 % и более. Для оценки микробиоценоза использовали метод количественного выделения вариантов микроорганизмов, входящих в состав микробиоценоза (Тец, 1997). При определении доли участия разных групп микроорганизмов в структуре микробиоценоза использовали показатель постоянства (Уиттекер, 1980). 5.2.3. Методы изучения протоценоза 5.2.З.1. Консервирование материала Свежие фекалии (3 г) помещали во флакон с консервирующей жидкостью в соотношении 1 : 3 и тщательно размешивали до получения гомогенной суспензии. Затем полученную суспензию помещали во флакон и плотно его закрывали. В качестве консервирующей жидкости использовали консервант Турдыева, который включает 0,2 % водный раствор 53 азотистокислого натрия 80 мл, концентрированного формалина 10 мл, концентрированного раствора Люголя (4 г йодистого калия, 100 мл дистиллированной воды, 2 г кристалического йода) 8 мл, глицерина 2 мл (Генис, 1979). 5.2.3.2, Метод обогащения материала Для повышения эффективности обнаружения простейших фекалии, помещенные в консервант, концентрировали методом формалин-эфирного * осаждения по Ритчи в модификации Аллена Ридли (Сахарова, 1997). Для этого пипеткой 2 3 мл отстоявшейся суспензии переносили в центрифужную пробирку, доливали 10 % раствор формалина до 6 7 мл, затем 2 3 мл эфира. Далее пробирку закрывали резиновой пробкой, энергично встряхивали в течение 30 секунд и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2-3 минут. После этого надосадочную жидкость и фекальную пробку удаляли, осадок использовали для микроскопии. 5.2.3.3. Микроскопия препаратов Выявление бластоцист в препаратах проводили путем микроскопии нативных или окрашенных мазков, либо после формалин-эфирного • осаждения но Ритчи в модификации Лллена-Ридли. Размеры бластоцист определяли при помощи окулярмикрометра. Для приготовления нативного препарата на предметное стекло пипеткой наносили каплю физраствора или раствора Люголя, в которых эмульгировали биологический материал. Далее мазок накрывали покровным стеклом. При необходимости с целью предотвращения высыхания препарата покровное стекло окантовывали вазелиновым маслом. Приготовленные препараты микроскоиировали (х10x40). Дополнительное окрашивание препаратов по методу по Романовскому-Гимзе и железным гематоксилином по Гейденгайну (рис. 1). |