|
папилломы человека) определяли методом полимеразной цепной реакции с использованием наборов «Полимик» (фирма ЛИТЕХ). Выявление ДНК ВПЧ проводили в лаборатории ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора методом ПЦР-анализа с применением комплекта реагентов «Ампли Сенс FRT ВПЧ ВКР Скрининг 4х» для выявления в одной пробирке ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов в соскобе. ПЦР-анализ проведен методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс-ПЦР) в режиме реального времени участков ДНК Е1-Е2 генов ВПЧ и участка ДНК (3-глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. Использовались четырехканальные приборы RotorGene 2000, 3000, 6000 («CorbettResearch», Австралия) или МхЗОООР («Stratagene», США.) Ультразвуковые исследования Ультразвуковая диагностика является одним из ведущих методов исследования в гинекологии и акушерстве, благодаря своей информативности, неинвазивности и относительной простоте проведения [26,31,121,263,278]. Внедрение в гинекологическую практику трансвагинальной эхографии и использование датчиков с высокой разрешающей способностью значительно расширили диапазон ультразвуковых исследований, приближая их по точности к морфологическому методу. Трансвагинальная эхография обладает рядом преимуществ. Использование датчиков высокой частоты (7-8 МГц) и непосредственного соприкосновения сканирующей поверхности с исследуемым органом или новообразованием улучшает качество изображения, что особенно важно для оценки состояния матки и фолликулярного аппарата яичников [26,130]. |
Для определения влагалищной микрофлоры проводилась микроскопия мазков из заднего свода, окрашенных гематоксилином и эозином. Для* оценки, состояния вагинального микробиоиеноза проводилиисследование для выявления возбудителей ИППП, микроскопию вагинального мазка, окрашенного по Граму, посев вагинального и цервикального содержимого на факультативно-анаэробную группу микроорганизмов и микроаэрофилы. Материал для бактериологического исследования из цервикального канала получали с помощью специальных одноразовых стерильных инструментов скринет. Посев на кокковую флору проводили на молочнокислый агар (для выделения штаммов стафилококка)и на кровяной агар (для обнаружения стрептококка), на среду Эндо и Ресселядля выявления, эитеробактерий. Осуществляли идентификацию выделенных микроорганизмов до вида, определяли их чувствительность к антибиотикам. Результаты интерпретировали по общепринятым, методикам с учетом рекомендаций в приказе М3. России от 22.04.1985 г. АЪ 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических)методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях ЛИ У». Инфекции, передаваемые половым путем (хламидии, уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы, вирус простого герпеса, цитомегаловирус, вирус папилломы человека) определяли методом полимеразной цепной реакции с использованием наборов «Полемик» (фирма ЛИТЕХ). Выявление ДНК ВПЧ проводили в лаборатории ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, методом ГГЦР-анализа с применением комплекта реагентов «Ампли Сенс FRT ВПЧ ВКР Скрининг 4х» для-выявления в одной пробирке ДНК вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов в соскобс. ПЦР-анализ проведен методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Метод основан на одновременной амплификации (мультиплекс-ПЦР)1в режиме реального времени участков ДНК Е1-Е2 генов ВПЧ и участка ДНК Р-глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. Использовались четырехканальиые приборы RotorGene 2000, 3000, 6000 («CorbettResearch», Австралия) или МхЗОООР («Stratagene», США.) Иммуноферментный метод В соответствии с задачами, поставленными в настоящей работе, проведены исследования, позволяющие определить содержание иммуноглобулинов отдельных изотопов в вагинально-цервикальном смыве у беременных при различных заболеваниях шейки матки в разные сроки гестации до и после применения терапии, а также у беременных без патологии шейки матки. Вагинально-цервикальный секрет для количественного определения иммуноглобулинов получали путем смыва выделений из шейки матки и влагалища 3,0 мл стерильного забуференного физиологического раствора pH 7,4. В полученный секрет добавляли 0,01% N aN 03, затем его центрифугировали при 8000 об/мин в течение 15 минут, Надосадочную жидкость отбирали и хранили при -20а С до исследования. Материал забирали до лечения и после ттего. В цервикальной жидкости у 75 беременных определяли концентрации IgA, IgG, IgM и slgA методом сэндвич иммуноферментного анализа (ИФА). При выявлении урогенитальной инфекции концентрации IgA, IgG, IgM и slgA определяли до, и после лечения. При постановке ИФА во все лупки 96 луночного плоскодонного полистиролыюго планшета («Биомедикал», Москва) помещали IgG фракции агггител (АТ), выделенные из козьих моноспецифических сывороток к IgA, IgG, IgM, содержащих АТ к тяжелой цени соответствующего изотипа. IgG — 62 молекулами IgA и slgA. При добавлении конъюгата к slgA происходило его взаимодействие только с молекулами slgA за счет присоединения к SCкомпоненту молекулы этого Ig. При этом свободный SC, который мог присутствовать в секрете, а также сывороточный IgA не определялись. Количество иммуноглобулинов рассчитывали, используя универсальную компьютерную программу для ИФА, разработанную в лаборатории молекулярной иммунологии МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. Для оценки содержания иммуноглобулинов в 1 мл вагинально-цервикального смыва полученные показатели увеличивали в 10 раз. Анализ изменения уровня иммуноглобулинов отдельных изотипов проводили путем сравнения средних величин в группах с помощью критерия Стьюдента. Ультразвуковые исследования Ультразвуковая диагностика является одним из ведущих методов исследования в гинекологии и акушерстве, благодаря своей информативности, неипвазивности и относительной простоте проведения [26,31,121,263,278]. Внедрение в гинекологическую практику трансвагинальной' эхографии*, и использование датчиков с высокой разрешающей способностью значительно расширили диапазон ультразвуковых исследований, приближая их по точности к морфологическому методу. Трансвагилальная эхография обладает рядом преимуществ. Использование датчиков высокой частоты (7-8 МГц) и непосредственного соприкосновения сканирующей поверхности с исследуемым органом или новообразованием улучшает качество изображения, что особенно важно для оценки состояния матки и фолликулярного аппарата яичников [26,130]. Эхографическое сканирование матки позволяет определить срок гестации, состояние и размеры плода. Трансвагинальное ультразвуковое исследование позволяет оценить длину и структуру шейки матки, состояние цервикального канала, определить наличие в нем объемных образований 64 |