|
Определение количества бактерий группы кишечных палочек (БГКП'). Бродильные сосуды с глюко:юпептонной средой заполняли исследуемой сточной водой. К 1 мл глюкозопептоиной среды добавляли 10 мл сточной воды, к 10 мл среды 100 мл сточной воды. Посевы 0,1-1 мл и по 1 мл из последующих 10-кратных разведений проводили в глкжозопептонную среду обычного состава и инкубировали в течение 24 часов при температуре 37°С. Отсутствие помутнения, образования кислоты и газа на глюкозопептоиной среде позволяло сделать заключение, что БГКП в исследуемом объеме сточной воды нет и закончить исследование через 24 ч. Из каждою сосуда с глюкозопептоиной средой, где отмечено помутнение, кислотои газообразование, делали посевы петлей штрихами на поверхности среды Эндо, разделенной на 3-4 сектора. Посевной материал брали с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Чашки с посевами помещали в термостат и инкубировали 16-18 ч при 37°С. При отсутствии роста колоний на среде Эндо, а также при наличии нехарактерных для БГКП колоний результат исследований на БГКП считали отрицател ьным. При росте на среде Эндо темно-красных колоний с металлическим блеском (или без него) их принадлежность к БГКП подтверждали микрокопированием и постановкой оксидазного теста. Наличие мелких, неспорообразующих грамотрицательных палочек в мазках и отрицательный оксидазный тест позволяли сделать заключение о наличии БГКП в анашзируемом объеме сточных вод. 11ри росте на среде Эндо нехарактерных для БГКП колоний из 2-3 разных типов готовили мазки, окрашивали их по Граму, микроскопировали и проверяли на оксидазную активность. При наличии только грамположилельных спорообразующих бактерий получали отрицательный результат. Наличие активной оксидазы у всех излучаемых культур бактерий позволяло дать заключение об отсутствии БГКП в анализируемом объеме сточной воды. 61 |
воды, к 10 мл среды 100 мл сточной воды. Посевы 0,1-1 мл и по 1 мл из последующих 10-кратных разведений проводили в глюкозо-пептонную среду обычного состава и инкубировали в течение 24 часов при температуре 37 °С. Отсутствие помутнения, образования кислоты и газа на глюкозопептонной среде позволяло сделать заключение, что БГКП в исследуемом объеме сточной воды нет и закончить исследование через 24 ч. Из каждого сосуда с гшокозо-пептонной средой, где отмечено помутнение, кислоюи газообразование, делали посевы петлей штрихами на поверхности среды Эндо, разделенной на 3-4 сектора. Посевной материал брали с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Чашки с посевами помещали в термостат и инкубировали 1618 ч при 37 °С. При отсутствии роста колоний на среде Эндо, а также при наличии нехарактерных для БГКП колоний результат исследований на БГКП считали отрицательным. При росте на среде Эндо темно-красных колоний с металлическим блеском (или без него) их принадлежность к БГКП подтверждали микрокопированием и постановкой оксидазного теста. Наличие мелких, неспорообразующих грамотрицательных палочек в мазках и отрицательный оксидазный тест позволяли сделать заключение о наличии БГКП в анализируемом объеме сточных вод. При росте на среде Эндо нехарактерных для БГКП колоний из 2-3 разных типов готовили мазки, окрашивали их по Граму, микроскопировали и проверяли на оксидазную активность. При наличии только грам положительных спорообразующих бактерий получали отрицательный результат. Наличие активной оксидазы у всех изучаемых культур бактерий позволяло дать заключение об отсутствии БГКП в анализируемом объеме сточной воды. При росте на среде Эндо грамотрицательных и оксидазоотрицательных бактерий засевали по 2 3 изолированные колонии разного типа с каждого сектора в полужидкую среду с глюкозой и инкубировали 24 ч при 37°С. 40 РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА Ферментация глюкозы с образованием кислоты и газа свидетельствовала о наличии БГКП, отсутствие кислоты и газа об их отсутствии. Результаты исследовашш выражали в виде коли-титра (или колииндекса). Постановка оксидазного теста. Две-три изолированные колонии микроорганизмов каждого типа, выросшие на среде Эндо, снимали петлёй и наносили штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазной активности бактерий. Если получали отрицательный оксидазный тест, фильтровальная бумага не изменяла цвета после нанесения бактериальной массы. Если бактерии образовывали активную оксидазу, фильтровальная бумага синела в течение 1 мин, в сомнительных случаях колонии отсеивали на МПА и после получения чистой культуры повторяли оксидазный тест. Исследования на энтеропатогенные кишечные палочки. Бродильные сосуды с глюкозо-пептонной средой заполняли исследуемой сточной водой (разными объёмами). Посевы стоков в объёмах 10 и 100 мл проводили соответственно в 1 мл и 10 мл концешрированной глюкозо-пептонной среды. Посевы сточной воды от 0,1 мл до 1 мл проводили последовательно в 10 мл глюкозо-пептонной среды обычного состава и инкубировали в течение 24 ч при 43°С. Из каждого сосуда с глюкозо-пептонной средой, где отмечено помутнение, образование газа и кислоты, делали посевы на среду Эндо. Посевной материал брали с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Чашки с посевами помещали в термостат и инкубировали в течение 16-18 часов при 37 °С. Выросшие на среде Эндо изолированные колонии a-форм, типичные для БГКП (2-3 колонии с каждого сектора) пересевали на МПА и инкубировали при 37 °С в течение 16-24 ч. Культуры использовали для приготовления мазков, постановки оксидазного теста, приготовления антигена. 41 |