Проверяемый текст
Варгина Виктория Николаевна. Остеопороз у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией и его коррекция альфакальцидолом (Диссертация 2005)
[стр. 102]

крови).
Образцы замораживались при температуре -40°С в холодильной камере.
При растворении лиофилизованных препаратов после добавления дистиллифлаконы выдерживались минут до встряхивания пользовании набора все компоненты должны быть комнатной температуры (1825° С).
Требуемое количество стрипов располагалось в рамке.
До использования, стрипы хранились в плотно запечатанном пакете с упаковками водопоглотителя.
Все анализы дублировались, 14 ячеек использовались для стандартов и контролен.

Стандарты (синтетический остеокальцин), контроли и образцы вносятся в соответствующие ячейки, после чего наносится смесь биотинилированных антител и антител, конъюгированных с пероксидазой.
Образовавшийся комплекс между антигеном и антителами сорбируется на поверхности, покрытой стрептавидином, через биотинилированные антитела.
После добавления субстрата ТМБ и остановки реакции серной кислотой измеряются оптические плотности в ячейках при 450 нм.
Затем смешивался коньюгат моноклональных антител против Nтерминального отрезка остеокальцина с пероксидазой и биотинилированные моноклональные антитела против mid-отрезка остеокальцина по 10 мл в равных мкл F), контролей (СО) образцов в соответствующие ячейки, затем добавлялось по 150 мкл смеси растворов антител.
Стандарты это готовые буферы с белковым стабилизатором, консервантом и с разной концентрацией синтетического человеческого остеокальцина: А=0 нг/мл, В=6,7 нг/мл, С=8,1 нг/мл, D—12,8 нг/мл, Е=33,3 нг/мл, F=117,0 нг/мл.
Контроль СО это раствор синтетического человеческого
остеокальцина с белковым стабилизатором и консервантом.
Стрипы заклеивались пленкой и инкубировались 120±5 мин при температуре 18-22°С без встряхивания.
После этого стрипы 5 раз обрабатывались отмывающим буфером, разбавленным 1 осушались ждым циклом промывки.
[стр. 107]

Тест-система основана на использовании двух высоко специфических моноклональных АТ к человеческому ОКЦ.
Одни АТ узнают среднюю часть (аминокислотные остатки 20-43) полипептида, захватывая его, а другие, конъюгированные с пероксидазой, узнают N-конечную область (аминокислотные остатки 20-43).
Дополнительно к интактному ОКЦ (1-49) детектируется N-конечный (Mid) фрагмент (1-43).
Перед исследование все компоненты набора приняли комнатную температуру (18-25° С), все анализы дублировались, 14 ячеек использовались для стандартов и контролен.
В начале исследования вносилось по 20 pL стандартов (A-F), контролен (СО) и образцов в соответствующие ячейки, покрытые стрептавидином, после чего добавлялось по 150 uL смеси биотинилированпероксидазои это готовые буферы с белковым стабилизатором , консервантом и с разной концентрацией синтетического человеческого ОКЦ: А=0 нг/мл, В=6,7 нг/мл, С=8,1 нг/мл, D=12,8 нг/мл, Е=33,3 нг/мл, F=117,0 нг/мл.
Контроль (СО) это раствор синтетического человеческого
ОКЦ с белковым стабилизатором и консервантом.
Затем закрытые изолентой стрипы инкубировались в течение 120±5 минут при комнатной температуре (18-20°С) без встряхивания.
Во время инкубации образуется комплекс между АГ и АТ, который сорбируется на поверхности, покрытой стрептавидином, через биотинилированные АТ.
Следом проводилась 5-ти кратная промывка ячеек отмывающим буфером, разбавленным 1:50 дистиллированной водой.
На следующем этапе исследования вносилось по 100 pL раствора субстрата в каждую ячейку и проводилась инкубация 15±2 мин в темноте при комнатной температуре.
Затем после добавления 100 pL раствора 0,18 М серной кислоты происходила остановка цветной реакции, и проводилось измерение оптической плотности в ячейках при 450 нм в течение 2-х часов.
При расчете результатов с начало определялись средние значения для дублей оптических плотностей за вычетом средней оптической плотности для стандарта А (бланк).
Затем строилась стандартная кривая, где по оси ор

[Back]