6.3.3. Определение показателей иммунного статуса Всем больным было проведено исследование иммунологических показателей. У больных определялось наличие антител к нативной ДНК с помощью непрямого твердофазного иммуноферментного метода (ELISA-тест) (24), АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции на гистологических срезах печени крысы (24), иммуноглобулинов класса IgA, IgM, IgG методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини(24), ревматоидного фактора методом латекс-агглютинации по стандартной методике (24), ЦИК методом преципитации 3,5% полиэтиленгликолем по Haskova в модификации Б.А.Лемперта (23). 6.3.3.1.Гистохимический метод выявления Na , К -зависимой аденозинтрифосфатазы Для выявления мембранной № +,К+-зависимой АТФ-азы был использован гистохимический метод с солями свинца по Вахштейну и Мейзель (1957). Для исследования бралось 10 мл венозной крови, взятой из локтевой вены путем венепункции с добавлением 2 капель гепарина (5000 ЕД/мл) в качестве антикоагулянта. После центрифугирования в режиме 1500 об/мин из полученного осадка лейкоконцентрата на обезжиренное предметное стекло наносился мазок, который после высушивания в течение 50 минут фиксировался в парах 10% формалина в течение 3 минут. После фиксации мазок был помещен в инкубационную смесь следующего состава: аденозинтрифосфат натрия —60 мг, 0,2М трис-малеатный буфер pH 7,2 —20 мл, магний сернокислый 5 мг, 0,4М раствор нитрата свинца 0,25 мл, дистиллированная вода до 50 мл. Приготовление 0,2М трис-малеатного буфера pH 7,2 выполнялось следующим образом: к 25 мл 0,2М раствора трис (гидроксиметил)-амимнометана добавлялось 45 мл 0,1Н раствора соляной кислоты. Затем дистиллированной водой объем доводился до 100 мл. Величина pH контролировалась путем pH-метрии. Мазки инкубировались в течение 20 часов в термостате при 37° С, затем промывались в трех сменах дистилированной воды по 1 мин в каждой. На следующем этапе мазки помещались в 1% раствор сульфида аммония на 2 минуты. Затем вновь промывались дистилированнои водой и высушивались. Для окраски ядер препараты по |
ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 5.1. ОБЩЕКЛИНИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Наблюдавшиеся нами больные проходили курс стационарного лечения в ревматологическом отделении МУЗ КБ №25. Все больные, находившиеся под нашим наблюдением, обследовались при поступлении в стационар. Поспециальное 12 месяцев, с включением клинико-лабораторного, иммунобиохимического и инструментального обследования, аналогичного таковому при включении больного в исследование. Все наблюдавшиеся нами больные находились на стационарном лечении в ревматологическом отделении ГКБ МУЗ №25. где проходили полное клинико-лабораторное и инструментальное обследование для оценки объективного статуса. Комплекс лабораторных тестов включал общий анализ крови и♦ мочи, определение общего белка, С-реактивного протеина, серомукоида, "печеночных" проб (общий билирубин, сулемовая и тимоловая пробы), креатинина, мочевины, сахара в сыворотке крови, исследование коагулограммы и проводился в клинической лаборатории ГКБ МУЗ №25. В иммунологической лаборатории ГУ Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной ревматологии РАМН под руководством заведующего лабораторией к.м.н. Гонтаря И.П. проводилось исследование общепринятых иммунологических показателей. У больных определялось наличие АТ к нативной ДНК с помощью непрямого твердофазного иммуноферментного метода (ELISA-тест), АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции на гистологических срезах печени крысы, иммуноглобулинов класса IgA, IgM, IgG методом радиальной иммунодиффузии в А геле по Манчини, ЦИК методом осаждения 3,5% полиэтиленгликолем по Haskova в модификации Б.А.Лемперта (36), исследование крови на РФ методом латекс-агглютинации. В отделении функциональной диагностики ГКБ МУЗ №25 всем больным проводились электрокардиография, рентгенография органов грудной |