6.3.1.3. Определение общего кальция в биологических жидкостях Количественное содержание кальция в крови и моче определялось биохимическим методом с использованием наборов фирмы “LACHEMA”. Принцип метода заключается в том, что кальций образует с глиоксаль-бис-(2оксианилом) в щелочной среде комплекс красного цвета, который определяется фотометрически. Нормальные величины: общий кальций в сыворотке крови 2,25-2,75 ммоль/л; экскреция кальция с мочой не более 300 мг/сут. 6.3.1.4. Определение неорганического фосфора в сыворотке крови Количественное содержание неорганического фосфора в сыворотке крови определялось биохимическим методом с использованием наборов фирмы “VITAL DIAGNOSTICS SPb” (Россия, Санкт-Петербург). Принцип метода заключается в том, что неорганический фосфор образует в растворе серной кислоты при взаимодействии с молибдатом аммония фосфомолибдатный комплекс, содержание которого определяется фотометрически при 340 нм. Нормальные величины: неорганический фосфор в сыворотке крови — 0,87-1,45 ммоль/л. 6.3.2. Исследование маркеров костногоремоделирования. 6.3.2.1. Методика определения Cross laps в моче Концентрация Cross laps, являющегося количественным показателем специфической аминокислотной последовательности коллагена I типа, определялась в моче методом иммуноферментного анализа с помощью комерческого набора реагентов CrossLaps™ ELISA Kit производства Osteometer BioTech A/S (Дания). Коллаген I типа составляет более 90% органического компонента кости и синтезируется в первую очередь в костной ткани (110). В ходе обновления костной ткани коллаген этого типа разрушается и экскретируется в мочу в виде небольших пептидных фрагментов. В наборе CrossLaps™ используются поликлональные антитела к аминокислотной последовательности EKAHD-(3-GGR, включающей Р-изомер (D) аспарагиновой кислоты. |
Нормальные величины: общая активность 67-167 нмоль/схл, тартратлабильная фракция-0-16,7 нмоль/схл. 5.3. 1.2.. Определение щелочной фосфатазы в сыворотке крови Костная фракция общей ЩФ продуцируется ОБ, и ее синтез возрастает при активации дифференцнровкн этих клеток в условиях усиления костеобразования. Предполагается, что костная ЩФ участвует в формировании и минерализации костного матрикса, и, что ее действие осуществляется при участии кальцитриола (394, 364). Активность общей ЩФ складывается из 50% костной фракции и 50% печёночной фракции ЩФ. Концентрация общей ЩФ в сыворотке определялась биохимическим методом с использованием наборов фирмы “LACHEMA”. ЩФ (щелочная фосфогидролаза моноэстеров ортофосфорной кислоты, К.Ф.3.1.3.1.-ЩФ) расщепляет в Ы-метил-О-глюкаминовом буфере 4-нитрофенилфосфат с образованием 4-ннтрофенола и фосфата. ЩФ активирована хлоридом натрия. Мерой каталитической концентрации фермента является количество освобожденного 4-нитрофенола, который определяют фотометрическим методом постоянного времени после остановки ферментативной реакции ингибитором ЩФ, который блокирует активный центр фермента. Нормальные величины: мужчины 0,90-2,3 мккат/л, женщины 0,74-2,1 мккат/л. 5.3.1.3.Определение общего кальция в биологических жидкостях Количественное содержание кальция в крови и моче определялось биохимическим методом с использованием наборов фирмы “LACHEMA”. Принцип метода заключается в том, что кальций образует с глиоксаль-бис-(2оксианилом) в щелочной среде комплекс красного цвета, который определяется фотометрически. Нормальные величины: общий кальций в сыворотке крови 2,25-2,75 ммоль/л; экскреция кальция с мочой не более 300 мг/сут. 5.3.1.4. Определение неорганического фосфора в сыворотке крови Количественное содержание неорганического фосфора в сыворотке кро и определялось биохимическим методом с использованием наборов фирмы VITAL DIAGNOSTICS SPb” (Россия, Санкт-Петербург). Принцип метода заключается в том, что неорганический фосфор образует в растворе серной кислоты при взаимодействии с молибдатом аммония фосфомолибдатный комплекс, содержание которого определяется фотометрически при 340 нм. Нормальные величины: неорганический фосфор в сыворотке крови — 0,87-1,45 ммоль/л. 5.3.2. Исследование специфических маркеров костного ремоделирования. 5.3.2.1. Методика определения Cross laps в моче Концентрация Cross laps, являющегося количественным показателем специфической аминокислотной последовательности коллагена I типа, определялась в моче методом иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов CrossLaps™ производства Ostcometer BioTech А/S (Дания). Коллаген I типа составляет более 90% органического компонента кости и синтезируется в первую очередь в костной ткани (128). В процессе обновления костной ткани коллаген этого типа разрушается и экскретируется в мочу в виде небольших пептидных фрагментов. В наборе CrossLaps™ используются поликлональные антитела к аминокислотной последовательности включающей р изомер (D) аспарагиновой кислоты. Сущность метода заключается в конкурентном связывании антиCrossLaps™ АТ с растворимым CrossLaps™-Ar или CrossLaps™-AT, пришитым к стенкам лунок микропланшета. Перед исследование все компоненты набора приняли комнатную температуру (18-25° С). Все анализы дублировались, 14 ячеек использовались для стандартов и контролей. Сначала в лунки вносилось по 15 мкл стандартов в буфере, содержащем CrossLaps™ АГ в различных концентрациях, белкового стабилизатора, детергента и консерванта (пробирки A-F); контроля (пробирка СО), содержащего мочу человека в буфере и исследуемых образцов. Стандарты —это готовые к употреблению буферы, содержащие белковый |