вазоактивными агентами, улучшая микроваскулярную проницаемость /Цейтин В.М. и соавт., 1982/. Недостатком короткоцепочных пептидов, как антикоагулянтов прямого действия, является их быстрая элиминация из кровотока /Чипенс Г.И., 1982/. Ассортимент изучаемых пептидных антикоагулянтов не ограничивается только синтетическими пептидами. Так, Е.А. Чирятьевым и соавт. /1980-2000 гг/ были обнаружены и изолированы пептиды из плазмы крови человека и животных, тормозящие процесс самосборки фибрина т У1У0 и т уПго. Расшифрован их аминокислотный состав и последовательность, определена физиологическая роль. При этом установлено, что обнаруженные пептидные ингибиторы являются наиболее древними регуляторами коагуляционного превращения фибриногена: их уровень в крови и тканях животных уменьшается по мере филогенетического и онтогенетического «старения», т.е. по мере уменьшения удельной значимости коагуляционного превращения фибриногена в цепи реакций, ведущих к образованию фибрина. Это согласуется с теорией о том, что биологически активные пептиды относятся к наиболее древним регуляторам многих биохимических и физиологических процессов, протекающих в организме в целом и отдельной живой клетке /Ашмарин И.П., 1979; Климов П.К., 1984/. В то же время использование пептидов животного происхождения с целью фармакологической коррекции гемостаза не представляется возможным развивающаяся после инъекции пептидов гипокоагулемия черезвычайно кратковременна в силу той же быстрой элиминации из кровотока /Чирятьев Е.А., 1990; Умутбаева М.К., 1984/. Одну из возможностей получения антикоагулянтов прямого действия представляют растения, относительно которых имеются ПО |
246 электростатической природой связей, возникающих при комплексообразовании пептид-мономер /Петросян М.Т. и соавт., 1984/. Установлено, что укорочение пептида с Сили М-конца, замена или перестановка одной из аминокислот, приводит к снижению или потере ингибиторной активности. Из синтезированных пептидов 01у-Рго, Рго-Аг^, 01у-Рго-Агд, С1у-$ег-Аг§-Рго, С1у-Оу$-Аг^-Рго, С1у-Рго-Аг^-Рго наиболее активен последний, несколько менее 01у-Рго-Аг^, остальные неактивны. Следовательно, для проявления антинолимсризационной активности необходимо наличие в пептиде природной последовательности 01у-Рго-Аг^, причем глицин должен находиться в первом положении. Указанный тип пептидов не только тормозит самосборку, но и ингибирует взаимодействие фибриногена с тромбоцитами, что предотвращает их агрегацию /Васильева Г.А. и соавт., 1983/, являются вазоактивными агентами, улучшая микроваскулярную проницаемость /Цейтин В.М. и соавт., 1982/. Недостатком короткоцепочечных пептидов как антикоагулянтов прямого действия является их быстрая элиминация из кровотока /Чипеис Г.И., 1982/. Ассортимент изучаемых пептидных антикоагулянтов не ограничивается только синтетическими пептидами. Так, Е.А. Чирятьевым и соавт. /1980-1996 гг./ были обнаружены и изолированы пептиды из плазмы крови человека и животных, тормозящие процесс самосборки фибрина т уйго и т У1УО. Расшифрован их аминокислотный состав и последовательность. Определена физиологические роль и значение. При этом установлено, что обнаруженные пептидные ингибиторы являются наиболее древними регуляторами коагуляционного превращения фибриногена, их уровень в крови и тканях животных уменьшается по мере филогенетиче 247 ского и онтогенетического «старения», т.е. по мере уменьшения удельной значимости коагуляционного превращения фибриногена в цепи реакций, ведущих к образованию фибрина. Это согласуется с теорией о том, что биологически активные пептиды относятся к наиболее древним регуляторам многих биохимических и физиологических процессов, протекающих в организме в целом и отдельной живой клетке /Ашмарин И.П. 1979, 1982; Климов П.К., 1984/. Мы получили высокоочищенные пептиды из плазмы крови человека с тем, чтобы уточнить некоторые аспекты механизма их влияния на процесс коагуляционного превращения фибриногена, а также для выяснения принципиальной возможности использования этих пептидов в качестве эффекторов свертывания плазмы крови Ш \ЧУО. Детально связывание ингибитора, полученного из плазмы крови человека, с фибрином мы изучили с помощью радиомеченного пептида, способа, предложенного В.А. Белицером и Т.В. Варецкой /1975/, а также приемом, позволяющим исследовать зависимость между степенью накопления мономерного фибрина (без образования зрелых протофибрилл, готовых к агрегации) и эффектом ингибитора самосборки. В первом варианте опытов самосборку в присутствии [13111ингибитора прерывали в различное время от ее начала добавлением в экспериментальную систему ТХУ. Выяснилось, что отделение белка на ранних этапах самосборки заметно снижает радиоактивность надосадка, а начиная с 1 /6 всей продолжительности самосборки удаление ингибитора с фибрином уменьшилось. По завершении фибринообразования, независимо от концентрации мономерного фибрина, вся внесенная радиоактивность (количество ин |