|
на с фибриногеном (I и II фазы свертывания) и этап коагуляционного превращения фибриногена (III фаза свертывания). Это позволило нам констатировать тот факт, что до 60% общей антикоагулянтной активности реализуется на уровне III фазы свертывания крови. Взаимодействие тромбина с фибриногеном протекает в два этапа, один из которых ферментативный, приводящий к образованию мономерного фибрина, а второй аутореакция, в результате которой формируется трехмерная структура фибрина. В свою очередь в аутополимеризации мономерного фибрина также можно выделить несколько стадий: первичное накопление мономерного фибрина и формирование олигомеров, взаимодействие олигомеров между собой и их латеральная агрегация, сопровождающаяся формированием протофибрилл и, наконец, агрегация протофибрилл и образование сети нестабилизированного фибрина. С помощью разработанных нами приемов, таких как дифференцированная оценка влияния ингибитора на ферментативную и неферментативную фазы превращения фибриногена в изолированной системе, содержащей фибриноген и тромбин, изучение влияния ингибитора на разные стадии самосборки фибрина, использование метода «тестирования стадий», разработанного В.А. Белицером (1975), мы убедились в том, что исследуемый нами эффектор преимущественное влияние (до 70% от общей антикоагулянтной активности) оказывает на неферментативный этап превращений фибриногена под действием тромбина, и, одновременно, несколько ограничивает сам процесс взаимодействия тромбина с фибриногеном (но не активность тромбина). Таким образом, основной точкой приложения изучаемой антикоагулянтной активности можно считать заключительную фазу свертывания с преимущественным влиянием эффектора на самосборку мономерного фибрина. Исследование самосборки в присутствии и отсутствии ингибитора в зависимости от условий 115 |
279ляционного превращения фибриногена (III фаза свертывания). Это позволило нам констатировать тот факт, что до 60% общей антикоагулянтной активности реализуется на уровне III фазы свертывания крови. Взаимодействие тромбина с фибриногеном протекает в дза этапа, один из которых ферментативный, приводящий к образованию мономерного фибрина, а второй аутореакция, в результате которой формируется трехмерная структура фибрина. В свою очередь в аутополимеризации мономерного фибрина также можно выделить несколько стадий: первичное накопление мономерного фибрина и формирование олигомеров, взаимодействие олигомеров между собой и их латеральная агрегация, сопровождающаяся формированием протофибрилл и, наконец, агрегация протофибрилл и образование сети нестабилизированного фибрина. С помощью разработанных нами приемов, таких как дифференцированная оценка влияния ингибитора на ферментативную и неферментативную фазы превращения фибриногена в изолированной системе, содержащей фибриноген и тромбин, изучение влияния ингибитора на разные стадии самосборки фибрина, использование метода «тестирования стадий», разработанного В.А. Белицером /1975/, мы убедились в том, что исследуемый нами эффектор преимущественное влияние (до 70% от общей антикоагулянтной активности) оказывает на неферментативный этап превращений фибриногена под действием тромбина, и, одновременно, несколько ограничивает сам процесс взаимодействия тромбина с фибриногеном (но не активность тромбина). 280 сборку мономерного фибрина. Исследование самосборки в присутствии и отсутствии ингибитора в зависимости от условий среды, в которой протекает процесс (изменение рН, ионной силы, содержания веществ, конкурирующих за водородные связи и температуры среды), позволило установить, что доминирующими силами, обеспечивающими взаимодействие субстрата с эффектором в физиологических условиях, являются электростатические силы. В заключительной серии экспериментов мы попытались оценить состояние гемокоагуляции при внутривенном введения фракции сапропеля, содержащей антикоагулянт, лабораторным животным. Но прежде мы выразили количество антикоагулянта в весовых единицах, что необходимо для проведения экспериментов на животных и при определениия острой токсичности. Следует оговориться, что в данном случае мы не пытались детально проанализировать состояние плазмокоагуляции в ответ на внутривенное ведение экстракта из сапропеля, полагая, что при позитивных предварительных результатах, указывающих на перспективность дальнейшего изучения новых антикоагулянтов, подобная работа должна быть проведена как самостоятельное исследование. В связи с этим мы определяли лишь те показатели, которые интегрально отражают общую свертывающую активность плазмы крови (время рекальцификации), скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном (тромбиновое время) и аутополимеризации мономерного фибрина (время самосборки фибрина в плазме), а также исследовали защитное действие антикоагулянта при экзогенной тромбинемии, вызванной инъекцией взвеси тромбопластина. Предварительные исследования показали, что ингибитор из |