у-402-411 проявлял дозазависимое ингибирование связывание фибриногена с ЛДФ и тромбин-индуцированными живыми или зафиксированными тромбоцитами и выступал как конкурентный антагонист. Ингибирующая активность не изменялась при добавлении одного у-401411 или двух у-400-411 глициловых остатков в ЫНг-концевом участке. Этот же процесс наблюдался в отношении связывания ,251фибронектина и 1-ф. Виллебранда. Способность пептидов ингибировать связывание лиганд с экспрессивными рецепторами клеток исключает влияние на индукцию рецептора, следовательно, три адгезивных СР совместно используют общий участок на активированных тромбином тромбоцитах и 10-ти аминокислотный пептид, соответствующий у-402-411, определяет специфику распознавания этого участка / Р1о\м Е.Р. е.а., 1992/. На это указывает то, что синтетический трипептид значительно более сильный ингибитор адгезии и агрегации, чем додекапептидная последовательность, соответствующая карбоксиконцевому участку у-цепи. Однако мутации в любой из последовательностей а-цепи нс оказывают влияния на агрегацию тромбоцитов, в то время как у-изменения приводят к значительному снижению связывания связывания и активированных и покоящихся тромбоцитов с фибриногеном /РаггеН Э.Н., ТЫасага]ап Р., 1994/. Возможно и то, что места на НЬЛНа-рецепторах, «узнающие» как первую, так и вторую цепочки, частично перекрываются / ВеппеП .1.5. е.а., 1988/, или же, что более вероятно, аллостерически взаимодействуют между собой /Р1о\у Е.Р. е.а., 1992., Са1уе1е 11, 1995/: наличие одного пептида вызывает изменение в комплексе, исключая, либо ограничивая влияние другого /ВеппеП 18. е.а., 1988/. По-крайней мере, узнающий центр тромбоцитарного рецептора содержит элементы обеих субъединиц комплекса СР НЬЛПа, локализация которого в СР ИЬ пока не установлена /Ркг^егаМ, 1989/. Возможно также, что обе цепоч36 |
-21 синтетический трипептид конкурентно ингибирует агрегацию тромбоцитов, вызванную АДФ. коллагеном и тромбином без ингибирования деформации тромбоцитов или секреции / Оаг1пег, ВсппеИ, 1985/. Вторая цепочка аминокислот, «узнаваемая» ПЬ/Шарецепторами тромбоцитов, представляет собой последовательность ЬСЮАКрАСШУ, расположенную в карбоксильном участке у-цепи фибриногена (у-остатки 402-411) и не обнаруженную у других лигандов /К1осге\\чак е.а., 1984/. Предполагается, что именно в этом месте фибриноген связывается с ПЬ/Ша-рецепторами /РаггеН е.а., 1992; АУе15е1 е.а., 1992/, хотя связь между «узнаваемыми» аминокислотными цепочками до конца не ясна. Так, показано, что синтетические пептиды, соответствующие СООНконцевой последовательности у-цепи фибриногена 403-411, используемые для анализа специфичности распознавания связывающих тромбоциты участков фибриногена, фибронектина и ф. Виллебранда, не ингибировали связывание 1251-фибриногена с тромбоцитами. Напротив, у-402-411 проявлял дозазависимое ингибирование связывания фибриногена с АДФ и тромбин-индуцированными живыми или зафиксированными тромбоцитами и выступал как конкурентный антагонист. Ингибирующая активность не изменялась при добавлении одного у-401-411 или двух у-400-411 глициловых остатков в 1МН2-концевом участке. Этот же процесс наблюдался в отношении связывания ,251-фибронектина и 1251-ф. Виллебранда. Способность пептидов ингибировать связывание лиганд с экспрессивными рецепторами клеток исключает влияние на индукцию рецептора, следовательно, три адгезивных белка совместно используют общий участок распознавания на активированных тромбином тромбоцитах, а декапептид, соответствующий у-402-411, определяет специфику распознавания этого участка /Р1о\у, СппзЬег^, 1981; -22Р1о\у е.а., 1984/. На это указывает то, что синтетический трипептид значительно более сильный ингибитор адгезии и агрегации, чем додекапептидная последовательность, соответствующая карбоксиконцевому участку у-цепи. Однако мутации в любой из последовательностей а-цепи не оказывают влияния на агрегацию тромбоцитов, в то время как у-изменения приводят к значительному снижению связывания и активированных и покоящихся тромбоцитов с фибриногеном /РаггеН, ТЫа^ага]ап, 1994/. Возможно и то, что места на НЬ/Ша-рецепгорах, «узнающие» как первую, так и вторую цепочки, частично перекрываются /Веппей е.а., 1988/, или же, что более вероятно, аллостсричсски взаимодействуют между собой /Р1о\у е.а., 1992; Са1уе1е, 1994/: наличие одного пептида вызывает изменение в комплексе, исключая, либо ограничивая влияние другого /ВеппеИ е.а., 1988/. По-крайней мере, узнающий центр тромбоцитарного рецептора содержит элементы обеих субъединиц комплекса СР ПЬ/Ша, локализация которого в ОР ИЬ пока не установлена /ЕйгцегаМ, 1989/. Возможно также, что обе цепочки аминокислот взаимодействуют с несколькими участками ИЬ/Ша-рецептора /Уиап е.а., 1993; Веппей е.а., 1988/. На покоящихся тромбоцитах ОР ИЬ/Ша-рецептор поддерживается в неактивной конформации и служит низкоаффинным рецептором для фибриногена (или других лиганд). При сигнале активации тромбоцита (шваШе-ои! сигнал) в пределах цитоплазмы изменяется его функция и он подвергается конформационному изменению в пределах своих экзоллазменных доменов, в результате чего ОР ИЬ/Ша-рецептор становится полноценным рецептором для растворимого фибриногена и других КОЭ-содержащих плазменных адгезивных белков /0'Тоо1е е.а., 1994/. После связывания лиганда дальнейшие структурные изменения вызывают ассоциацию до рецептор связанных комплексов лиганд-ОР ПЬ/Ша в пределах |