|
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Материалом для исследования послужил сапропель озера Большой Тараскуль, расположенного в Тюменской области. Извлечение из сырья получали способом, заключающимся в экстракции 0,1 М раствором гидроксида натрия при комнатной температуре и соотношении сырье:экстрагент 1:3. Полученное извлечение отстаивали, замораживали при -20°, после размораживания и отстаивания декантировали, концентрировали на ротационном испарителе, центрифугировали, подвергали ультрафильтрации на полупроницаемой мембране. Более подробно способ получения экстракта описан в разделе “Собственные исследования”. Фракции экстракта получали путем высаливания сульфатом аммония (100% насыщение, рН 7,25), центрифугирования (7 ООО &), обессоливания путем перевода фракции в спиртовый раствор (96% этанол), удаления этанола выпариванием на ротационном испарителе, растворения сухого экстракта в 0,07 М растворе натрия хлорида и гельфильтрации на сефадексе С-50 (колонка 10 х 300 мм, элюент 0,07 М раствор натрия хлорида). Гидролиз носителя антикоагулянтной активности с целью определения его природы осуществляли 6 Н хлористоводородной кислотой при 110°С, 24 ч /Шталь Э., 1965/. Хлористоводородную кислоту из гидролизата удаляли выпариванием на водяной бане, сухой остаток растворяли в дистиллированной воде и хроматографировали на бумаге РЫ-2 в системе растворителей н-бутанол:уксусная кислота:вода в соотношении 4:1:2. В качестве проявляющего реагента использовали нингидриновый реактив, состоящий из 100 мл ацетона, 1 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл воды и 1 г нингидрина. 47 |
-333. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Материалом для исследования послужил сапропель озера Большой Тараскуль, расположенного в Тюменской области. Извлечение из сырья получали способом, заключающимся в экстракции 0,1 М раствором гидроксида натрия при комнатной температуре и соотношении сырье:экстрагент 1:3. Полученное извлечение отстаивали, замораживали при -20°, после размораживания и отстаивания декантировали, концентрировали на ротационном испарителе, центрифугировали, подвергали ультрафильтрации на полупроницаемой мембране. Более подробно способ получения экстракта описан в разделе “Собственные исследования”. Фракции экстракта получали путем высаливания сульфатом аммония (100% насыщение, рН 7,25), центрифугирования (7 ООО д), обессоливания путем перевода фракции в спиртовым раствор (96% этанол), удаления этанола выпариванием на ротационном испарителе, растворения сухого экстракта в 0,07 М растворе натрия хлорида и гель-фильтрации на сефадексе С-50 (колонка 10 х 300 мм, элюснт 0,07 М раствор натрия хлорида). Гидролиз носителя антикоагулянтной активности с целью определения его природы осуществляли 6 Н хлористоводородной кислотой при 110°С, 24 ч /Шталь Э., 1965/. Хлористоводородную кислоту из гидролизата удаляли выпариванием на водяной бане, сухой остаток растворяли в дистиллированной воде и хроматографировали на бумаге РЫ-2 в системе растворителей нбутанол:уксусная кислота:вода в соотношении 4:1:2. В качестве проявляющего реагента использовали нингидриновый реактив, состоящий из 100 мл ацетона, 1 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл воды и 1 г нингидрина. |