|
Мономерный фибрин получали из коммерческого фибриногена по И.М. Радзевич, Е.А. Ходоровой /1969/ в модификации Е.А. Чирятьева /1990/. Концентрацию мономерного фибрина определяли спектрофотометрически, принимая Е28о=15,67 /Т.П. Угарова, В.А. Белицер, 1978/. Скорость самосборки фибрина определяли в системе , содержащей 0,5 мл 0,075 М боратного буфера с рН 7,6, 0,1 мл исследуемого препарата и 0,1 мл 1x10 М раствора мономерного фибрина (опыт). В контроле исследуемый препарат заменяли равным объемом растворителя. Антикоагулянтную активность фракций экстракта оценивали т уйго но его влиянию на: 1) скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном. 2) скорость аутополимеризации мономерного фибрина по Е.А. Чирятьеву/1989/. 3) время рекальцификации и тромбиновое время по В.П. Балуда и соавт. /1980/. Здесь и выше результаты выражали в значениях эффективности торможения (1) по формуле: 1=1Уо/Ук, где У0 и Ук скорость реакции в опыте и контроле соответственно. Степень изменения активности антикоагулянта в процессе его очистки рассчитывали в процентах, принимая, что активность извлечения, полученного после ультрафильтрации, составляет 100%. Количественно содержание антикоагулянта во фракциях выражали в единицах активности (ЕА), принимая за 1 ЕА количество эффектора, вызывающего 1= 0,3. 4) время рекальцификации, определяемое с помощью электрокоагулографа Н-334 согласно инструкции по использованию прибора. 5) скорость и степень адреналин-, и АДФ-зависимой агрегации тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме, определяемой с помощью анализаторов агрегации тромбоцитов “Биохиммак” и “Биола 230ЬА” согласно инструкций по использованию приборов. 48 |
-34Мономерный фибрин получали из коммерческого фибриногена по И.М. Радзевич, Е.А. Ходоровой /1969/ в модификации Е.А. Чирятьева /1990/. Концентрацию мономерного фибрина определяли спектрофотомстрически, принимая Еоасп 15,67 /Т.П. Угарова, В.А. Белицер, 1978/. Скорость самосборки фибрина определяли в системе, содержащей 0,5 мл 0,075 М боратного буфера с рН 7,6, 0,1 мл исследуемого препарата и 0,1 мл 1x10 М раствора мономерного фибрина (опыт). В контроле исследуемый препарат заменяли равным объемом растворителя. Антикоагулянтную активность фракций экстракта оценивали т уИго по его влиянию на: 1) скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном. 2) скорость аутополимеризации мономерного фибрина по Е.А. Чирятьеву /1989/. 3) время рекальцификации и тромбиновое время по В.П. Балуда и соавт. /1980/. Здесь и выше результаты выражали в значениях эффективности торможения (1) по формуле: 1= 1 -У0/Ук, где У0 и Ук скорость реакции в опыте и контроле соответственно. Степень изменения активности антикоагулянта в процессе его очистки рассчитывали в процентах, принимая, что активность извлечения, полученного после ультрафильтрации, составляет 100%. Количественно содержание антикоагулянта во фракциях выражали в единицах активности (ЕА), принимая за 1 ЕА количество эффектора, обуславливающее эффективность торможения равную 0,3. 4) время рекальцификации, определяемое с помощью электрокоагулографа Н-334 согласно инструкции по использованию прибора. -355) скорость и степень адреналин-, и АДФ-зависимой агрегации тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме, определяемой с помощью анализаторов агрегации тромбоцитов “Биохиммак” и “Биола 230БА” согласно инструкций по использованию приборов. 6) процесс взаимодействия тромбина с фибриногеном, определяемый нефелометрически с помощью анализатора агрегации тромбоцитов “Биола 2300. ”. Оптическую плотность фракций экстракта, полученных после гель-фильтрации определяли с помощью спектрофотометра СФ-46 (210-300 нм) и колориметра ФК-56 М (490 им). 1п У1У0 предварительную оценку состояния плазмокоагуляции производили по изменению времени рекальцификации, тромбиновому времени и продолжительности самосборки фибрина в плазме крови экспериментальных животных. Эффекторы лабораторным животным вводили в яремную вену после эфирного наркоза. В опытах использовано 125 белых беспородных крыс весом 180 220 граммов. В пределах одной серии опыта вес животных не различался более чем на 20 г. Все болезненные манипуляции выполнялись на наркотизированных животных. В работе использованы следующие препараты и реактивы. 1. Тромбин, фибриноген (Каунас); 2. Гепарин ($ро!а); 3. Набор аминокислот (КеапаО; 4. Сефадексы 0-15 0-200 (РНагтааа); 5. Наборы для определения агрегационной активности тромбоцитов (Кеапа1, Биола); 6. Плазма крови доноров, стабилизированная 3,8% раствором натрия цитрата. Результаты исследований подвергались математической обработке методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений /Бессмертный В.С., 1967; Венецкий И.Г., 1970/. Достоверность различия между средними величинами определялась с использованием критерия х2, критерия Стьюдента, различия прини |