|
Таблица 1 Количество эффекторов во фракциях сапропеля и их оптическая плотность до и после замораживания при различном значении температуры Температура, °С Количество ЕА/мл Оптическая плотность до замораживания 20,25±2,2 0,12910,006 10 20,06+0,9 0,11010,007 15 19,96+2,4 0,09210,002 20 19,89±1,6 0,08610,004 25 19,89±1,0 0,08510,002 Как следует из таблицы 1, различие в содержании эффекторов во фракциях до и после замораживания при различных температурах не значительно максимально всего на 1,7%. Оптическая же плотность различается весьма заметно; после 6-ти часового замораживания она снизилась на 34%, что свидетельствует о существенной очистке носителя антикоагулянтной активности. Следует отметить, что дальнейшего изменения оптической плотности фракции при замораживании ниже -20°С практически не происходит, следовательно этот параметр является оптимальным для достижения поставленной цели. На степень очистки оказывает влияние и время, в течение которого происходит замораживание. С целью определения наиболее эффективного времени, фракции экстракта замораживали при -20°С в течение времени, указанного в таблице 2. По размораживании определяли те же показатели. Из данных, представленных в таблице 2 видно, что содержание эффекторов после размораживания и центрифугирования пракгически не изменяется, в то время, как оптическая плотность через 24-30 часов от начала эксперимента снижается почти на 50%. Следовательно, оптимальное время, в течение которого осуществляется замораживание, составляет 24 ч. 56 |
191ингибитора в 1 мл и оптическую плотность при длине волны 465 нм (табл. 37). Таблица 37 Количество антикоагулянта во фракциях сапропеля и их оптическая плотность до и после замораживания при различном значении температуры _______________________ ___________________ Температура, °С Количество ЕА/ мл Оптическая плотность до замораживания 20,25±2,2 0,129 ± 0,006 10 20,06±0,9 0,110 ±0,007 15 19,96±2,4 0,092 ± 0,002 20 19,89±1,6 0,086 ± 0,004 25 19,89±1,0 0,085 ± 0,002 Как следует из таблицы 37, различие в содержании антикоагулянта во фракциях до замораживания и после замораживания при различных температурах не значительно максимально всего на 1,7%. Оптическая же плотность различается весьма заметно; после 6-ти часового замораживания она снизилась на 34%, что свидетельствует о существенной очистке носителя антикоагулянт ной активности. Следует отметить, что изменения оптической плотности фракции при замораживании ниже -20°С практически не происходит, следовательно этот параметр является оптимальным для достижения поставленной цели. На степень очистки оказывает влияние и время, в течение которого происходит замораживание. С целью определения наиболее эффективного времени фракции экстракта замораживали при -20°С в течение времени, указанного в таблице 38. По размораживании определяли те же показатели. Из вышеуказанной таблицы видно, что содержание ингибитора после размораживания и центрифугирования практически не изменяется, в то время, как оптическая плотность по окончании 192эксперимента снижается почти на 50%. Следовательно, оптимальное время, в течение которого осуществляется замораживание, составляет 24 ч. Таблица 38 Количество антикоагулянта во фракциях сапропеля и их оптическая плотность при замораживании при -20°С в течение различного времени__________ ____________________ ____________________ Время, в течение которого производилось замораживание, ч Количество НА /мл Оптическая плотность до замораживания 20,25±2,0 0,129 ± 0,007 1 20,02±2,2 0,103 ±0,004 3 19,94± 1,9 0,092 ± 0,006 б 19,89±0,8 0,086 ± 0,003 12 19,86±0,6 0,081 ± 0,004 18 19,83±1,5 0,074 ± 0,003 24 19,82±2,1 0,067 ± 0,005 30 19,82±2,0 0,067 ± 0.002 Следующим приемом выделения антикоагулянта мы избрали гель-фильтрацию на геле Сефадекс. С этой целью были опробованы гели с различным пределом исключения: С-50, С-100, С-150 и С-200. При использовании первых двух, фракции с антикоагулянтной активностью обнаруживались во внешнем объеме колонки совместно с пиком оптической плотности, т.е. очистки практически не происходило. Применение же гелей С-150 или С-200 привело (как это показано ранее) к разделению пиков антикоагулянтной активности и оптической плотности (рис. 34). Судя по изменению оптической плотности (мы предположили, что по мере повышения степени очистки антикоагулянта оптическая плотность его раствора при стремится к нулю), степень очистки пиковой фракции по сравнению с исходным экстрактом |