|
кая чувствительность к ингибитору процесса самосборки мономерного фибрина. Так, для достижения 50% торможения (1=0,5) скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном требуется больше ингибитора в 1,7 раза, чем для достижения такой же степени торможения процесса полимеризации мономерного фибрина, что согласуется с результатами эксперимента, иллюстрированного рисунком 15. В то же время, ингибитор из сапропеля способен ограничивать и фазы свертывания, предшествующие тромбинообразованию. Это было установлено в опыте с использованием в качестве субстрата дефибринированной надеванием плазмы крови. Нативную пулированную плазму крыс освобождали от фибриногена нагреванием на водяной бане при 53°С в течение двух минут. Полноту осаждения фибриногена определяли путем добавления к дефибринированной плазме 0,55% раствора хлорида кальция; в течение шести часов образования сгустка не происходило, но внесение в вышеуказанную систему фибриногена (4 мг/мл) вызывало свертывание. Рисунок 17. Зависимость эффективности торможения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ордината) от концентрации ингибитора из сапропеля (абсцисса). 75 |
138Рисунок 26. Зависимость эффективности торможения скорости полимеризации мономерного фибрина от концентрации ингибиторов. Обозначения те же, что и на рисунке 25. Обращает на себя внимание более высокая чувствительность к ингибиторам процесса самосборки мономерного фибрина. Так, для достижения 50% торможения 0=0,5) скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном требуется больше ингибитора в 4,7 для окопника, в 3,5 раза для нонеи, медуницы и кривоцвета, чем для достижения такой же степени торможения процесса полимеризации мономерного фибрина. Взаимодействие тромбина с фибриногеном включает в себя два этапа: ферментативный, приводящий к образованию мономерного фибрина, и непосредственно самосборку мономеров. Влияние ингибиторов на самосборку можно считать установленной. В то же время остается не ясным вопрос о их влиянии на ферментативный этап этого процесса. Для разрешения этого вопроса мы инкубировали при 37°С раствор фибриногена (120 мг/мл) в 0,14 М растворе хлорида 2 1 8 самосборки мономерного фибрина. Так, для достижения 50% торможения 0 = 0,5) скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном. требуется больше ингибитора в 1,7 раза, чем для достижения такой же степени торможения процесса полимеризации моноРисунок 55. Зависимость эффективности торможения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ордината) от концентрации ингибиторов из сапропеля, ЕА (абсцисса). Рисунок 56. Зависимость эффективности торможения скорости полимеризации мономерного фибрина (ордината) от концентрации антикоагулянта, ЕА (абсцисса). 2 1 9 В то же время, ингибитор из сапропеля способен ограничивать и фазы свертывания, предшествующие тромбинообразованию. Это было установлено в опыте с использованием в качестве субстрата дефибринированной нагреванием плазмы крови. Нативную пулированную плазму крыс освобождали от фибриногена нагреванием на водяной бане при 53°С в течение двух минут. Полноту осаждения фибриногена определяли путем добавления к дефибринированной плазме 0,55% раствора хлорида кальция; в течение шести часов образования сгустка не происходило, но внесение в вышеуказанную систему фибриногена (4 мг/мл) вызывало свертывание. Для дифференциации влияния изучаемого ингибитора на этапы свертывания, обеспечивающие тромбиногенез и тромбинзависимого превращения фибриногена, мы провели следующий эксперимент. В первом случае к 0,1 мл дефибринированной плазмы прибавляли 0,1 мл раствора фибриногена (4 мг/мл), 0,1 мл раствора антикоагулянта ( ЕА/мл) и 0,1 мл 0,55% раствора кальция хлорида, оценивая при этом возможный суммарный эффект ингибитора на свертывающий потенциал плазмы крови. В контроле раствор антикоагулянта заменяли равным объемом физиологического раствора. В другом случае, для оценки влияния ингибитора на тромбинзависимое превращение фибриногена, к 0,1 мл дефибринированной плазмы прибавляли 0,1 мл 0,55% раствора хлорида кальция и инкубировали в течение времени достаточном для образования тромбина, после чего прибавляли по 0,1 мл растворов антикоагулянта и фибриногена. В контроле антикоагулянт заменяли на физиологический раствор (табл. 42). Как следует из представленных в таблице данных, антикоагулянт из сапропеля оказывает преимущественный эффект на этап |