|
Самосборка мономерного фибрина также включает в себя два этапа: формирование из мономеров протофибрилл и последующую их агрегацию, приводящую к формированию трехмерной сети. В связи с этим представляется интересным выяснить, как зависит эффект ингибитора от количества постоянно образующегося мономерного фибрина с одновременным формированием протофибрилл в субфизиологических условиях, а также на какие преимущественно этапы в процессе формирования протофибрилл он оказывает влияние. Для решения этих вопросов мы осуществили взаимодействие фибриногена (2 мг/мл) и тромбина (1 мг/мл) в 0,14 М растворе хлорида натрия в пробирках, термостатированных при 37°С. Одновременно, а в последующем через равные интервалы времени после начала реакции, к смеси прибавляли по 18,5 ЕА раствора ингибитора. В контроле вместо ингибитора вносили адекватное количество физиологического раствора. В этих условиях в результате взаимодействия тромбина с фибриногеном продуцируется мономерный фибрин. В случае, когда ингибитор вносится в реакционную смесь одномоментно с остальными компонентами реакции, он оказывает влияние на весь процесс формирования протофибрилл. В последующем ингибиторы взаимодействует не только с образующимися мономерами, но и с полимерами различной степени зрелости (рис. 21). Как следует из рисунка, в контроле скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном (скорость образования фибрина) не изменяется на всем протяжении опыта. В опыте же этот параметр претерпевает существенные изменения и описывается параболической кривой. При использовании ингибиторов в указанной концентрации в случае их внесения в реакционную смесь одномоментно с тромбином и фибриногеном, скорость образования фибринового сгустка через 5, 10, 15, 20, 25, 30 с после инициации реакции ниже контрольной на 52, 31, 26, 12,5,1 и 0,0% соответственно. 81 |
142зующегося мономерного фибрина с одновременным формированием протофибрилл в субфизиологических условиях, а также на какие преимущественно этапы в процессе формирования протофибрилл они оказывают влияние. Для решения первого вопроса мы осуществляли взаимодействие фибриногена (200 мг%, 0,1 мл) и тромбина (1 мг/мл, 0,1 мл) в 0,14 М растворе натрия хлорида в пробирках, термостатированных при 37Х. Одновременно, а в последующем через равные интервалы времени после начала реакции, к смеси прибавляли по 0,1 мл растворов ингибиторов (0,64x10'3, 0,68x10'3, 1,1x10"3 и 1,25x10'3 мг/мл для эффекторов из нонеи темной, медуницы мягчайшей, кривоцвета полевого и окопника лекарственного соответственно). В контроле вместо ингибиторов вносили по 0,1 мл физиологического раствора. В этих условиях в результате взаимодействия тромбина с фибриногеном продуцируется мономерный фибрин. В случае, когда ингибиторы вносятся в реакционную смесь одномоментно с остальными компонентами реакции, они оказывают влияние на весь процесс формирования протофибрилл. В последующем ингибиторы не только взаимодействуют с образующимся мономером, но и полимерами различной степени зрелости (рис. 28). Поскольку, как и в предыдущем эксперименте, исследуемые зависимости для всех носителей антикоагулянтной активности носят одинаковый характер, мы сочли возможным представить лишь одну из характерных иллюстраций рисунок 28. Как следует из рисунка 28 в контроле скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном (скорость образования фибрина) не изменяется на всем протяжении опыта. В опыте же этот параметр претерпевает существенные изменения и описывается параболической кривой. При использовании ингибитора в указан 2 2 4 ваются обе фазы коагуляционного превращения фибриногена, то на долю торможения самосборки приходится около 67% от общего антикоагулянтного эффекта. Самосборка мономерного фибрина также включает в себя два этапа: формирование из мономеров протофибрилл и последующую их агрегацию, приводящую к формированию трехмерной сети. В связи с этим представляется интересным выяснить, как зависит эффект ингибитора от количества постоянно образующегося мономерного фибрина с одновременным формированием протофибрилл в субфизиологических условиях, а также на какие преимущественно этапы в процессе формирования протофибрилл он оказывает влияние (эксперимент аналогичен эксперименту, иллюстрированному рисунком 31). Для решения этих вопросов мы осуществили взаимодействие фибриногена (2 мг/мл) и тромбина (1 мг/мл) в 0,14 М растворе хлорида натрия в пробирках, термостатированных при 37°С. Одновременно, а в последующем через равные интервалы времени после начала реакции, к смеси прибавляли по 18,5 ЕА раствора ингибитора. В контроле вместо ингибитора вносили адекватное количество физиологического раствора. В этих условиях в результате взаимодействия тромбина с фибриногеном продуцируется мономерный фибрин. В случае, когда ингибитор вносится в реакционную смесь одномоментно с остальными компонентами реакции, он оказывает влияние на весь процесс формирования протофибрилл. В последующем ингибитор взаимодействует не только с образующимися мономерами, но и с полимерами различной степени зрелости (рис. 59). Как следует из рисунка, в контроле скорость взаимодействия тромбина с фибриногеном (скорость образования фибрина) не изменяется на всем протяжении опыта. В опыте же этот параметр 225 претерпевает существенные изменения и описывается параболической кривой. При использовании ингибитора в указанной концентрации в случае его внесения в реакционную смесь одномоментно с тромбином и фибриногеном, скорость образования фибринового сгустка через 5, 10, 15, 20, 25, 30 с после инициации реакции ниже контрольной на 52, 31, 26, 12, 5,1 и 0,0% соответственно. Если принять за 100% время, за которое образуется фибриновый сгусток в отсутствие ингибитора или в случае его внесения з момент агрегации, то время влияния ингибитора на процесс формирования протофибрилл составляет 81% от контрольного, т.е. при достижении протофибриллами достаточно высокой степени зрелости ингибитор перестает оказывать влияние на их дальнейший рост и агрегацию. Таким образом, на основании вышеприведенных данных можно сделать предварительное заключение о том, что с учетом ограничения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ограничения ферментативного этапа этой реакции) наблюдается явная тенденция влияния ингибитора на более ранние стадии формирования протофибрилл, уменьшения этого влияния в процессе роста волокон и полного его отсутствия при прохождении около 2/3 пути от момента появления первых мономеров до образования фибринового сгустка. Это заключение мы проверили исследуя влияние ингибитора непосредственно на самосборку мономерного фибрина по методу, предложенному В.А. Белицером /1975/(суть эксперимента изложена на стр. 70) ( рис. 60). Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее восприимчивы к действию ингибитора мономеры фибрина и его олигомеры, а по мере созревания протофибрилл ингибирующий эффект антикоагулянта снижается и по истечении 74% времени, необходимого для завершения образования фибри |