|
Рисунок 21. Зависимость скорости (V, Л100) реакции взаимодействия тромбина с фибриногеном (ордината) при внесении ингибитора в реакционную смесь через равные интервалы времени (с) после инициации реакции (абсцисса). 1 контроль, 2 опыт. Если принять за 100% время, за которое образуется фибриновый сгусток в отсутствие ингибиторов или в случае их внесения в момент агрегации, то время влияния ингибиторов на процесс формирования протофибрилл составляет 81% от контрольного, т.е. при достижении протофибриллами достаточно высокой степени зрелости ингибиторы перестают оказывать влияние на их дальнейший рост и агрегацию. Таким образом, на основании вышеприведенных данных, можно сделать предварительное заключение о том, что с учетом ограничения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ограничения ферментативного этапа этой реакции) наблюдается явная тенденция влияния ингибиторов на более ранние стадии формирования протофибрилл, уменьшения этого влияния в процессе роста волокон и полного его отсутствия при прохождении около 2/3 пути от момента появ82 |
143ной концентрации, полученного из нонеи темной, в случае его знесения в реакционную смесь одномоментно с тромбином и фибриногеном, скорость образования фибринового сгустка снижается на 44,5%. При запаздывающем внесении ингибитора скорость образования фибринового сгустка через 5, 10, 15, 20 и 25 с после инициации реакции ниже контрольной на 30, 15,5, 7,1, 3,1 и 0,0% соответственно. Если принять за 100% время, за которое образуется фибриновый сгусток в отсутствие ингибитора или в случае его внесения в момент агрегации, то время влияния ингибитора на процесс формирования протофибрилл составляет 77% от контрольного, т.е. при достижении протофибриллами достаточно высокой степени зрелости ингибитор перестает оказывать влияние на их дальнейший рост и агрегацию. Рисунок 28. Зависимость скорости реакции взаимодействия тромбина с фибриногеном (ордината) при внесении ингибитора из нонеи темной в реакционную смесь через равные интервалы времени после инициации реакции (абсцисса). 1 контроль, 2 -опыт. Похожими кривыми описывается и зависимость скорости формирования фибринового сгустка при воздействии на этот 144процесс ингибиторов, выделенных из кривоцвета полевого, окопника лекарственного и медуницы мягчайшей. Следует подчеркнуть, что время влияния этих эффекторов на процесс формирования протофибрилл составляет от 67,5 до 75% от контрольного. Таким образом, на основании вышеприведенных данных можно сделать предварительное заключение, что даже с учетом ограничения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ограничения ферментативного этапа этой реакции) наблюдается явная тенденция преимущественного влияния ингибиторов на более ранние стадии формирования протофибрилл, уменьшения этого влияния в процессе роста волокон и полного его отсутствия при прохождении 2/3 пути от момента появления первых мономеров до образования фибринового сгустка. Это важное, на наш взгляд, заключение мы проверили, исследуя влияние ингибиторов непосредственно на самосборку мономерного фибрина по методу, предложенному В.А. Белицером /1975/, суть которого описана в разделе 4.1., стр. 70. Прерывистой линий представлено время самосборки мономерного фибрина в контроле (рис. 29). Прямая 1 характеризует изменение времени самосборки в случае одинаковой чувствительности всех ее этапов к действию ингибиторов. Кривая 2 экспериментально установленное время самосборки. В эксперименте использован мономерный фибрин в концентрации 2x10'6 М и ингибиторы из нонеи темной, медуницы мягчайшей, кривоцвета полевого и окопника лекарственного в концентрациях 0,64х10*3, 0,68х103, 1,1x103 и 1,25х 10*3 мг/мл. Самосборку провоцировали 0,075 М боратным буфером с рН 7,6. Также, как и двух последних экспериментах, характер изучаемых зависимостей был одинаков, поэтому и в данном случае во 225 претерпевает существенные изменения и описывается параболической кривой. При использовании ингибитора в указанной концентрации в случае его внесения в реакционную смесь одномоментно с тромбином и фибриногеном, скорость образования фибринового сгустка через 5, 10, 15, 20, 25, 30 с после инициации реакции ниже контрольной на 52, 31, 26, 12, 5,1 и 0,0% соответственно. Если принять за 100% время, за которое образуется фибриновый сгусток в отсутствие ингибитора или в случае его внесения з момент агрегации, то время влияния ингибитора на процесс формирования протофибрилл составляет 81% от контрольного, т.е. при достижении протофибриллами достаточно высокой степени зрелости ингибитор перестает оказывать влияние на их дальнейший рост и агрегацию. Таким образом, на основании вышеприведенных данных можно сделать предварительное заключение о том, что с учетом ограничения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ограничения ферментативного этапа этой реакции) наблюдается явная тенденция влияния ингибитора на более ранние стадии формирования протофибрилл, уменьшения этого влияния в процессе роста волокон и полного его отсутствия при прохождении около 2/3 пути от момента появления первых мономеров до образования фибринового сгустка. Это заключение мы проверили исследуя влияние ингибитора непосредственно на самосборку мономерного фибрина по методу, предложенному В.А. Белицером /1975/(суть эксперимента изложена на стр. 70) ( рис. 60). Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее восприимчивы к действию ингибитора мономеры фибрина и его олигомеры, а по мере созревания протофибрилл ингибирующий эффект антикоагулянта снижается и по истечении 74% времени, необходимого для завершения образования фибри |