|
Рисунок 22. Время самосборки фибрина в опыте с внесением ингибитора в разные сроки от начала процесса. Пояснения в тексте. Как видно из приведенного графического материала экспериментальная кривая отклоняется вниз от теоретической, что свидетельствует о неодинаковой чувствительности к ингибитору разных этапов процесса самосборки. Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее восприимчивы к действию ингибиторов мономеры фибрина и его олигомеры, а по мере созревания протофибрилл ингибирующий эффект антикоагулянтов снижается и по истечении 74% времени, необходимого для завершения образования фибрина, действие ингибитора на процесс самосборки прекращается, что полностью подтверждает высказанное выше предположение о преимущественном влиянии изучаемого антикоагулянта на начальные этапы неферментативного процесса коагуляционного превращения фибриногена. В следующей серии экспериментов мы попытались определить, взаимодействует ли изучаемый нами антикоагулянт с участниками реакции нлазмокоагуляции. Для этого к раствору ингибитора добавляли раствор фибриногена различной концентрации и раствор тромбина (1,5 84 |
145избежание загромождения диссертации приводим лишь одну характерную иллюстрацию. Рисунок 29. Время самосборки фибрина в опытах с внесением ингибитора из нонеи темной в разные сроки от начала процесса. 1 теоретически расчитанная кривая; 2 экспериментальная кривая; 3 контроль. Как видно из выше приведенного графического материала экспериментальная кривая отклоняется вниз от теоретической, что свидетельствует о неодинаковой чувствительности к ингибиторам разных этапов процесса самосборки. Представленные на рисунке 29 графики с полной определенностью свидетельствуют, что наиболее восприимчивы к действию ингибиторов мономеры фибрина и его олигомеры, а по мере созревания протофибрилл ингибирующий эффект антикоагулянтов снижается и по истечении 62,5% времени, необходимого для завершения образования фибрина, действие на процесс самосборки ингибитора из нонеи прекращается. 225 претерпевает существенные изменения и описывается параболической кривой. При использовании ингибитора в указанной концентрации в случае его внесения в реакционную смесь одномоментно с тромбином и фибриногеном, скорость образования фибринового сгустка через 5, 10, 15, 20, 25, 30 с после инициации реакции ниже контрольной на 52, 31, 26, 12, 5,1 и 0,0% соответственно. Если принять за 100% время, за которое образуется фибриновый сгусток в отсутствие ингибитора или в случае его внесения з момент агрегации, то время влияния ингибитора на процесс формирования протофибрилл составляет 81% от контрольного, т.е. при достижении протофибриллами достаточно высокой степени зрелости ингибитор перестает оказывать влияние на их дальнейший рост и агрегацию. Таким образом, на основании вышеприведенных данных можно сделать предварительное заключение о том, что с учетом ограничения скорости взаимодействия тромбина с фибриногеном (ограничения ферментативного этапа этой реакции) наблюдается явная тенденция влияния ингибитора на более ранние стадии формирования протофибрилл, уменьшения этого влияния в процессе роста волокон и полного его отсутствия при прохождении около 2/3 пути от момента появления первых мономеров до образования фибринового сгустка. Это заключение мы проверили исследуя влияние ингибитора непосредственно на самосборку мономерного фибрина по методу, предложенному В.А. Белицером /1975/(суть эксперимента изложена на стр. 70) ( рис. 60). Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее восприимчивы к действию ингибитора мономеры фибрина и его олигомеры, а по мере созревания протофибрилл ингибирующий эффект антикоагулянта снижается и по истечении 74% времени, необходимого для завершения образования фибри -226 на, действие ингибитора на процесс самосборки прекращается, что полностью подтверждает высказанное выше предположение о преимущественном влиянии изучаемого антикоагулянта на начальные этапы неферментативного процесса коагуляционного превращения фибриногена. Рисунок 59. Зависимость скорости (с^хЮО) реакции взаимодействия тромбина с фибриногеном (ордината) при внесении ингибитора в реакционную смесь через равные интервалы времени (с) после инициации реакции, с (абсцисса). 1 контроль, 2 опыт. Далее мы попытались определить характер этого взаимодействия. В первой серии экспериментов изучали зависимость скорости самосборки фибрина от значения рН или ионной силы среды, в которой протекает процесс в отсутствие (контроль) и в присутствии экстракта. Необходимые значения рН в системе самосборки создавали, используя для разбавления фибринмономера 0,075 М боратный буфер с различными значениями рН. |