|
Как видно на рисунке 23, скорость самосборки фибрина в контроле (кривая 1) нарастает с повышением рН, достигая максимума при его значении, близком к рН 7,6, несколько снижаясь в дальнейшем. В присутствии ингибитора с нарастанием рН на всем интервале изучаемых значений, скорость самосборки существенно ограничивается. Это наблюдение свидетельствует о том, что ингибитор из сапропеля ограничивает самосборку фибрина путем взаимодействия с субстратом самосборки мономерным фибрином за счет электростатических связей /Луговской Э.В. и соавт., 1978; Луговской Э.В., 1982/. Анализ результатов эксперимента указывает также на то, что при изменении среды самосборки от слабощелочной (рН 7,6) в кислую (до рН 6,5), тормозящий эффект ингибитора уменьшается, что свидетельствует об участии в образовании электростатических связей отрицательно заряженных функциональных групп. Возникновение электростатических взаимодействий между мономерным фибрином и ингибитором самосборки нами подтверждено дополнительно при изучении влияния на этот процесс ионной силы: если взаимодействие происходит за счет электростатических связей, то эффективность торможения самосборки должна изменяться и при изменении ионной силы (Белицер В.А., Варецкая Т.В., 1975). Ионную силу в экспериментах изменяли, используя для провокации самосборки фибрина боратный буфер (0,075 М, рН 7,6) с различным содержанием хлорида натрия. Эти растворы использовали для разбавления раствора мономерного фибрина в контрольных (без ингибитора) и опытных ( с ингибитором ) пробах. Как видно на рисунке 24, эффективность торможения самосборки фибрина экстрактом из сапропеля возрастает с повышением ионной силы в среде самосборки, что в сочетании с данными, полученными при изучении влияния рН, на скорость самосборки в присутствии ин87 |
76Далее с целью определения характера сил, обеспечивающих взаимодействие пептида с мономерным фибрином, мы изучили влияние на эффективность торможения самосборки фибрина условий среды. По данным литературы факторами, влияющими на продолжительность самосборки и ее торможение известными ингибиторами, з частности, фрагментом О, являются изменения ионной силы или рН среды и ее температуры, а также присутствие в среде самосборки мочевины /Луговской Э.В., Белицер В.А., 1971; Белицер В.А., Варецкая 'Г.В., 1975/. В связи с. этим мы установили влияние этих параметров на эффективность торможения самосборки ингибитором пептидной природы животного происхождения. Как и в предыдущем случае использовали пептид с молекулярной массой 1 470 Да. Ионную силу в экспериментах изменяли, используя для провокации самосборки фибрина боратный буфер (0,075 М, рН 7,6) с различным содержанием натрия хлорида. Эти растворы использовали для разбавления 1x10'6 М растворов мономерного фибрина в контрольных (без ингибитора) и в опытных (с ингибитором) пробах (рис. 5). Как следует из результатов эксперимента зависимость более выражена при меньшей концентрации ингибитора. Это обусловлено, по-видимому, тем, что в опытах с большей концентрацией ингибитора значительная эффективность торможения выявлялась уже при низкой ионной силе. Увеличение ионной силы удлиняет путь самосборки: при высокой ионной силе в агрегацию могут вовлекаться лишь более зрелые полимеры /Белицер В.А., Варецкая Т.В., 1975/. Вероятно ингибитор, как это показано выше, активнее взаимодействуя с мономерным фибрином и продуктами ранних стадий полимеризации, при •227 Рисунок 60. Время самосборки фибрина в опыте с внесением ингибитора в разные сроки от начала процесса. Пояснения в тексте. Как видно на рисунке 61, скорость самосборки фибрина в контроле (кривая 1) нарастает с повышением рН, достигая максимума при его значении, близком к рН 7,6, несколько снижаясь в дальнейшем. В присутствии ингибитора с нарастанием рН на всем интервале изучаемых значений, скорость самосборки существенно ограничивается. Это наблюдение свидетельствует о том, что ингибитор из сапропеля ограничивает самосборку фибрина путем взаимодействия с субстратом самосборки мономерным фибрином за счет электростатических связей /Луговской Э.В. и соавт., 1978; Луговской Э.В., 1982/. Анализ результатов эксперимента указывает также на то, что при изменении среды самосборки от слабощелочной (рН 7,6) в кислую (до рН 6,5), тормозящий эффект ингибитора уменьшается, что свидетельствует об участии в образовании электростатических связей отрицательно заряженных функциональных групп. -228 Рисунок 61. Зависимость скорости самосборки от рН в отсутствие (1) и в присутствии (2) ингибитора. Абсцисса значение рН; ордината скорость реакции. Возникновение электростатических взаимодействий между мономерным фибрином и ингибитором самосборки нами подтверждено дополнительно при изучении влияния на этот процесс ионной силы: если взаимодействие происходит за счет электростатических связей, то эффективность торможения самосборки должна изменяться и при изменении ионной силы (Белицер В.А., Варецкая Т.В., 1975). Ионную силу в экспериментах изменяли, используя для провокации самосборки фибрина боратный буфер (0,075 М, рН 7,6) с различным содержанием хлорида натрия. Эти растворы использовали для разбавления раствора мономерного фибрина в контрольных (без ингибитора) и опытных (с ингибитором) пробах. Как видно на рисунке 62, эффективность торможения самосборки фибрина экстрактом из сапропеля возрастает с повышением ионной силы в среде самосборки, что в сочетании с данными, полученными при изучении влияния на скорость самосборки в присутствии ингибитора, однозначно свидетельствует о роли элек |