|
56 сыворотки крови, взятых спустя 20 минут после употребления молока, обогащенного протеином (порция содержит 10 г протеина). Образцы центрифугировали при 1500 х g в течение 10 минут и хранили при температуре -20°С до проведения анализа. Серологическое исследование производилось посредством иммуноферментного анализа с использованием коммерческого набора Biohit GastroPanel* (Biohit Pic, Helsinki, Finland) с определением концентраций G17 и PG1, а также титров НРАЬ. В соответствии с инструкцией фирмыпроизводителя, маркером атрофии слизистой оболочки тела желудка считали уровни PG1 < 2 5 мкг/л; маркером атрофии антрального отдела уровни G17 < 5 пмоль/л. Сывороточные уровни G17 < 10 пмоль/л в сочетании с уровнями PG1 < 50 мкг/л расценивались как маркеры слабо выраженной атрофии тела желудка. Интерпретация результатов выявления НРАЬ производилась следующим образом: титры НРАЬ < 32 EIU (EIU иммуноферментная единица) негативный результат; 32 44 EIU сомнительный результат; > 44 E1U позитивный результат. >0.1 пмоль/л, Рис. 3.1. Интерпретация результатов иммуноферментного исследования при помощи тестовой панели Biohit GastroPanel*. Алгоритм интерпретации результатов иммуноферментного исследования |
дуемого под углом 45° к небу, так, чтобы трубка не касалась его. Вновь включали аспиратор на 1 минуту, после чего производили измерение высоты окрашенного столба. Полученное значение представляло собой нагрузочную концентрацию аммиака в ротовой полости (С2). Если пациент инфицирован я H.pylori, то уреазная активность бактерии приведет к гидролизу карбамида с появлением аммиака в выдыхаемом воздухе. Далее вычисляли ДС = С2 С1. При значениях ДС > 2 мм тест считался положительным. * В случае получения положительных результатов быстрого уреазного и дыхательного тестов делали заключение о возможном наличии H.pylori инфекции у пациента. Результат сопоставляли с клиническим' статусом исследуемого субъекта. Для подтверждения наличия H.pylori инфекции или констатапии ложно-негативного результата предпринимали дальнейшее исследование объектов при помощи иммунологических методов. Результаты быстрого уреазного и дыхательного тестов у лиц контрольной группы были отрицательными в 100% случаев. 2.2.4. Методика иммуноферментного исследования концентраций пепсиногена-1 и гастрина-17 и выявления анти-H.pylori-IgG в сыворотке крови Для выявления концентраций пепсиногена-1 (PG1) и антител класса IgG к H.pylori (НРАЬ) производили взятие образцов сыворотки крови натощак. Постпрандиальную концентрацию гастрина-17 (G-17) определяли в образцах сыворотки крови, взятых спустя 20 минут после употребелния молока, обогащенного протеином (порция содержит 10 г протеина). Образцы центрифугировали при 1500 х g в течение 10 минут и хранили при температуре -20°С до проведения анализа. Серологическое исследование производилось посредством иммуноферментного анализа с использованием коммерческого набора Biohit GastroPanel® (Biohit Pic, Helsinki, Finland) с определением концентраций G17 и PG1, а также титров НРАЬ. В соответствии с инструкцией фирмыпроизводителя, маркером атрофии слизистой оболочки тела желудка считали уровни PG1 <25 мкг/л; маркером атрофии антрального отдела уровни G17 < 5 пмоль/л. Сывороточные уровни G17 < 10 пмоль/л в сочетании с уровнями PG1 < 50 мкг/л расценивались как маркеры слабо выраженной атрофии тела желудка. Интерпретация результатов выявления НРАЬ производилась следующим образом: титры НРАЬ < 32 ЕЩ (ЕЩ —иммуноферментная единица) —негативный результат; 32 44 ЕШ —сомнительный результат; > 44 ЕШ — позитивный результат. : Алгоритм интерпретации результатов иммуноферментного исследования маркеров функциональной активности слизистой оболочки желудка показан на рисунке 2.3. й 30 EJU. Z.25 мкг/л, < 25 мкг/л, 5~<10 пмоль/л, 2 10пмоль/л. < 5 лмоль/л. >0.1 пмоль/л, >'10 пмоль/л, < 10 ПМОЛЬ/Л, < 50 мкг/л. 2 50 мкг/л, г 26 мкг/л, < 25 мкг/л. & 25 мкг/л, < 25 мкг/л. Норма Атрофический гастрит . .тела г аутоимунный киШстрт аутоимунный или Нр+ Неатрофичвский гастрит Гастрит Нр+ Атрофический гастрит антралъныйДела Нр+ Рис. 2.3. Интерпретация результатов иммуноферментного исследования при помощи тестовой панели Biohit GastroPanel®. Количественные значения исследуемых параметров анализировали при помощи компьютерной программы GastroSoft® (Biohit Pic, Helsinki, Finland), прилагаемой к тест-системам Biohit GastroPanel®. Программа, на основе введенных данных, формулирует предполагаемый диагноз с учетом наличия или отсутствия H.pylori —инфекции и атрофического гастрита, с оценкой степени риска развития РЖ и язвенной болезни; помимо этого, программа выдает рекомендации по необходимости проведения эрадикационной терапии в соответствии с консенсусом Maastricht 2 [45]. |