57 маркеров функциональной активности слизистой оболочки желудка показан на рисунке 3.1. Количественные значения исследуемых параметров анализировали при помощи компьютерной программы GastroSoft® (Biohit Pic, Helsinki, Finland), прилагаемой к тест-системам Biohit GastroPanel®. Программа, па основе введенных данных, формулирует предполагаемый диагноз с учетом наличия или отсутствия H.pylori инфекции и атрофического гастрита, с оценкой степени риска развития РЖ и язвенной болезни; помимо этого, программа выдает рекомендации по необходимости проведения эрадикационной терапии в соответствии с консенсусом. Maastricht 2 [186]. 3.3. Western Blot —анализ При проведении Western blot анализа мы использовали тест-систему HELICOBLOT 2.0, разработанную фирмой Genelabs Diagnostic (Singapore). Данная система позволяет целенаправленно выявлять в сыворотке крови специфические TgG к 6 белковым антигенам H.pylori с различной молекулярной массой: антигену CagA (116кДа), VacA (89кДа), жгутиковому антигену массой 35 кДа и уреазо-ассоциировалиым протеинам И, А, Е массой, соответственно, 30, 26,5 и 19,5 кДа. В качестве антигена использовался лизат штамма H.pylori. Белки лизата после электрофоретического разделения были нанесены на нитроцеллюлозные мембраны. Полоски нитроцеллюлозной мембраны инкубировались с предварительно разведенными образцами сывороток. В случае существования специфических антител последние связывались с антигенами полосок. После отмывки и удаления не связавшихся антител полоски обрабатывали раствором коньюгата (для связывания специфических антител комплекса, сформированного на тестовой мембране). Визуализация образованных комплексов производилась при помощи BCIP/NBT субстрата (5-бром-4-хлоро-индолил-фосфата (BCIP) и нитросинего тетразоля (NBT)). Результат реакции считался положительным в том |
Несвязанный выявляющий реагент удаляли в процессе вторичной промывки. Шарики инкубировали с раствором субстрата для развития окраски, интенсивность которой пропорциональна количеству связанного фермента. После остановки ферментативной реакции серной кислотой, фотометрически измеряли экстинкцию при 492 нм и сравнивали с положительным и отрицательным контролем, которые анализировали параллельно. Положительной считали пробу с поглощением выше уровня, который определялся добавлением коэффициента 0,04 к среднему значению отрицательных контролем 2.2.5. Western Blot анализ При проведении Western blot анализа мы использовали тест-систему HELICOBLOT 2.0, разработанную фирмой Genelabs Diagnostic (Singapore). Данная система позволяет целенаправленно выявлять в сыворотке крови специфические IgG к 6 белковым антигенам H.pylori с различной молекулярной массой: антигену CagA (116кДа), VacA (89кДа), жгутиковому антигену массой 35 кДа и уреазо-ассоциированным протеинам Н, А, Е массой, соответственно, 30, 26,5 и 19,5 кДа. В качестве антигена использовался лизат штамма H.pylori. Белки лизата после электрофоретического разделения были нанесены на нитроцеллюлозные мембраны. Полоски нитроцеллюлозной мембраны инкубировались с предварительно разведенными образцами сывороток. В случае существования специфических антител последние связывались с антигенами полосок. После отмывки и удаления не связавшихся антител полоски обрабатывали раствором коньюгата (для связывания специфических антител комплекса, сформированного на тестовой мембране). Визуализация образованных комплексов производилась при помощи BCIP/NBT субстрата (5-бром-4-хлоро-индолил-фосфата (BCIP) и нитросинего тетразоля (NBT)). |