|
46 количестве 50 мг наносили на подготовленный участок кожи один раз в сутки в одно и то же время стеклянной палочкой, растирали тонким слоем. После нанесения на кожу исследуемого вещества животных фиксировали для предупреждения слизывания препарата на 4 часа и вели наблюдение по общепринятой схеме. Эвтаназию проводили под эфирным рауш-наркозом. Метод оценки острой токсичности Исследование острой токсичности данных средств было проведено на мышах массой 18-25 г. Изучаемые средства вводили парентерально, внутрибрюшинно и peros соответственно по 1 мл в виде 25% суспензии через шприц. Объем суспензии составил 0,5 мл/10 г массы тела. За животными после введение препарата наблюдали в течение через один час первых суток, затем в течение 14 суток в одно и то же время (Рисунок 5). Рисунок 5 – Наблюдение за животными при изучении острой токсичности Критериями оценки острой токсичности были: поведение животных, активность, наличие седации, одышка, частота сокращения брюшных мышц при дыхании, степень реакции на внешние раздражители. Результаты, полученные в исследуемой группе, оценивали после сопоставления с результатами контрольной группы животных. Субхроническая и хроническая токсичность Эксперимент проведен на 40 белых крысах популяции линии «Wistar». Перед проведением эксперимента все крысы были взвешены и размечены. Часть животных была оставлена для контроля и не подвергалась каким-либо |
40 2.5 Методы исследования общего воздействия новой фармакологической композиции на лабораторных животных. Методы оценки общетоксических свойств Для выполнения поставленных задач был проведен ряд исследований согласно Методическим рекомендациям НЦ ЭГКЛС Минздрава России: «Правила доклинической оценки безопасности фармакологических веществ» (1985), «Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств» (Колла В.Э., Сыропятов Б.Я., 1998), «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005). Учитывая малую токсичность изучаемых препаратов, при изучении общего действия их вводили в максимально допустимых объемах. Густые формы смешивали с водой для внутрибрюшной инъекции в соотношении 1:1. В желудок препараты вводили при помощи эластического зонда. При определении накожного действия все изучаемые вещества наносили на участок кожи кроликов с выстриженной шерстью размером 7х8 см. Стрижку шерсти производили каждые 7 дней. Фармакологическую композицию в количестве 50 мг наносили на подготовленный участок кожи один раз в сутки в одно и то же время стеклянной палочкой, растирали тонким слоем. После нанесения на кожу исследуемого вещества животных фиксировали для предупреждения слизывания препарата на 4 часа и вели наблюдение по общепринятой схеме. Эвтаназию проводили под эфирным рауш-наркозом. Острая токсичность Эксперимент проведен на 30 белых мышах (масса – 23-25 г). Для постановки эксперимента в исследуемой группе готовили 25%-ый раствор новой фармакологической композиции. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду. В обеих группах изучаемый препарат вводили однократно внутрибрюшинно, внутрижелудочно. Наблюдение осуществляли в 41 течение 2 недель. Критериями оценки острой токсичности были: поведение животных, активность, наличие седации, одышка, частота сокращения брюшных мышц при дыхании, степень реакции на внешние раздражители. Результаты, полученные в исследуемой группе, оценивали после сопоставления с результатами контрольной группы животных. Субхроническая и хроническая токсичность Эксперимент проведен на 60 белых крысах популяции линии «Wistar». Перед проведением эксперимента все крысы были взвешены и промаркерованы. Часть животных была оставлена для контроля и не подвергалась каким-либо воздействиям. Затем после двухнедельной адаптации животных к условиям вивария было проведено наблюдение за их поведением в тесте «Открытое поле». После этого новую фармакологическую композицию наносили ежедневно в течение 30 дней местно на резцы верхней и нижней челюсти, осуществляли повторные наблюдение в «открытом поле». Критериями оценки субхронической токсичности были общее состояние животных, прирост массы тела, количество пересеченных квадратов в «открытом поле», число вставаний на задние лапы, обследований нор, грумминг («умывание»). Методы оценки аллергизирующего действия. Конъюнктивальная проба Эксперимент проводили на 5 кроликах. На подготовленный участок кожи ежедневно в течение 20 дней наносили испытуемый препарат в дозе 10 мг. Через 24 часа после двадцатой аппликации всем животным проводили конъюнктивальную пробу. Для этого под верхнее веко правого глаза вводили по одной капле препарата, смешанного с дистиллированной водой в соотношении 1:10. Левый глаз служил контролем, под его верхнее веко вводили каплю дистиллированной воды. Результаты оценивали через 15 минут, 24 и 48 часов. Критериями положительной конъюнктивальной пробы были развитие помутнения роговицы, острое воспаление слизистой оболочки. |