Проверяемый текст
Квасова, Наталья Анатольевна; Биологические свойства простейших Blastocystis hominis и их влияние на микроэкологию кишечника (Диссертация 2002)
[стр. 47]

В двухфазной яичной среде Zierdt в качестве твердой фазы использовали коагулированное в скошенном положении содержимое куриного яйца.
Жидкая фаза представляет собой раствор
Хенкса или Среду 199 с добавлением сыворотки крови кур, крупного рогатого скота, лошади.
Анаэробные условия достигали путем наслаивания на среду 1-2 мл стерильного масла, pH среды 7,0-7,2.
Среда
Suresh содержит экстракт дрожжей, однозамещенный фосфорнокислый калий и двузамещешшй фосфорнокислый калий.
В случае необходимости длительного культивирования в среду вносили полную бактериологическую петлю культуры Proteus vulgaris, выращенную на
скошеином мясопсптонном агаре при температуре 37°С (Suresh et al., 1993).
2.1Л.
Лабораторные животные Эксперименты проводили на нелинейных
лабораторных мышах массой 23,1±2,2 г, крысах-самцах массой 220,3+25,6 г, которых содержали в условиях постоянного температурного режима (20° 25°С) и стабильной освещёшюсти.
Животные получали полноценное питание.
Перед проведением экспериментов и опытные, и контрольные группы находились в карантине.

В этот период наблюдали за общим состоянием животных, производили периодическое взвешивание.

Для исключения влияния суточных ритмов на результаты экспериментов все манипуляции (введение культуры, взятие крови и т.д.) проводили в одно и то же время суток, обычно в
утрегаше часы, как у опытных, так и контрольных животных.
При необходимости животных забивали внутривенным введением 5% тиопентала.

47
[стр. 46]

46 которых подробно изучалась микрофлора киш ечника и биологические свойства, вы деленны х из фекалий, простейш их B.hom inis.
Г р у ш у сравнения составили 80 практически здоровы х людей.
2.1.МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1.1, Лабораторные животные Эксперименты проводили на нелинейны х м ы ш ах массой 20 25 г, кроликах породы ш инш илла массой 2,8-3,0 кг, которых содерж али в условиях постоянного температурного реж им а (20° 25°С) и стабильной освещ ённости.
Ж ивотны е получали полноценное питание.
П еред проведением экспериментов и опытные, и контрольные группы находились в карантине:
белые мы ш и в течение трёх недель, кролики один месяц.
В этот период наблю дали за общ им состоянием ж ивотны х, производили периодическое взвеш ивание.

К роликам для выявления скрыты х форм ластерелдеза вводили в носовы е ходы по 2 капли 0,5% водного раствора бриллиантовой зелени.
Яхли но истечении 3 дней ш носа появлялось слизисто-гнойное отделяемое, то это свидетельствовало о наличии в организме животного возбудителя пастереллытеза, носителями которых они часто являю тся.
Таких ж ивотны х в эксперимент не брати.
Д ля исклю чения влияния суточных ритмов на результаты экспериментов все манипуляции (введение культуры, взятие крови и т.д.) проводили в одно и то ж е время суток, обы чно в
утреш ш е часы , как у опы тны х, так и контрольных ж ивотны х.
П ри необходимости ж ивотны х забивали внутривенным введением 5% ти оп ен тала
2,1.2.
Культу ра Blastocystis hominis К линические изоляты B lastocystis hom inis вы деляли в областной клинической больнице № 1, городской больнице № 1, больнице скорой ме

[стр.,47]

47 дицинской помопщ г.Ульяновска из фекалий детей в возрасте от 3 до 7 лет и взрослых в возрасте от 30 до 45 дет, находящихся на стационарном лечении с диагнозами: язвенная болезнь, хронический гастрит, хронический холецистит, хронический гепатит, неснецнфический язвенный колит, цирроз печени, желчно-каменная болезнь, синдром оперированного желудка и синдром раздраженной кишки.
Исследования по выделению и первичной идентификации бластоцист из биологического материала проводили на базе клинической лаборатории городской больницы №1 г.Ульяновска (зав.
лабораторией Т.И.Волгина ).
Для получения клинических изолятов бластоцист фекалии собирали в чисто вымытые флаконы, не содержащие следов химических реактивов, дезинфицирующих веществ и антибиотиков.
При доступе свободного кислорода бластоцисты гибнут в течение нескольких часов, поэтому материал для посева лучше использовать сразу после получения.
Пробы фекалий заливали равным объемом (1:1) физиологического раствора, суспендировали и фильтровали через один слой марли.
Фильтрат' в объеме 0,5-1,0 мл вносили в пробирку со средой Suresh (1993), засевали одновременно 5-6 пробирок и культивирование проводили при температуре 37°С (Т.В.Сахарова, 1997).
Для культивирования простейших использовали среды Павловой, Циерта и Суреша.
Среда Павловой содержит лошадиную сыворотку, однозамещенный фосфорнокислый калий и двузамещеииый фосфорнокислый натрий.
Перед посевом в каждую пробирку' добавляют 1-2 петли мелкого стерильного рисового крахмала.
В двухфазной яичной среде Циерта в качестве твердой фазы используют коагулированное в скошенном положении содержимое куриного яйца.
Жидкая фаза представляет собой раствор
Хснкса или Среду 199 с добавле

[стр.,48]

48 ниш сыворотки крови кур.
крупного рогатого скота, лошади.
Анаэробные условия достигались путем наслаивания на среду 1-2 мл стерильного масла, pH среды 7,0-7,2.
Среда
Суреша содержит экстракт дрожжей, однозамещенный фосфорнокислый калий и двузамещенный фосфорнокислый калий.
В случае необходимости длительного культивирования в среду вносили полную бактериологическую петлю культуры Proteus vulgaris, выращенную на
скошенном мясопептонном агаре при температуре 37°С.
(K.Suresh et al., 1993).
2.2 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Таблица 3 Объем проведенных исследований : Методы исследований Количество исследований 1.
Метод консервирования 500 2.
Метод обогащения материала 550 3.
Микроскопия нативных препаратов 1800 4.
Окраска препаратов по Романовскому' 450 5.
Окраска препаратов железным гематоксилином по Гейденгайну 250 6.
Определение патогенности микроорганизмов путём внутрибрюшинного заражения мышей 888 7.
Метод определения энтеротоксической активности 300 8.
Воспроизведение экспериментального бластоцистоза 250 9.
Исследование микрофлоры кишечника 800 10.
Морфологический метод 350 11.
Определение количества лейкоцитов в периферической крови 250

[Back]