|
Таксономическую принадлежность изолированных бактерий оценивали на основании изучения роста бактерий в аэробных и анаэробных условиях, отношения к окраске по Граму, характера роста на селективных средах, биохимической и серологической идентификации. Количество микроорганизмов подсчитывали по формуле: для плотных сред X = 20 •х *п•х •к , для жидких сред X = 2 ■ х ■ к где X количество микроорганизмов каждого вида (КОЕ/г), п количество выросших колоний, к разведение, го которого произведен посев с обратным знаком степени. 2 .1 .2 ,2, Оценка кишечного микробиоценоза Оценку микробиоценоза проводили с использованием метода количественного выделения видов и вариантов микроорганизмов, входящих в состав микробиоценоза (Тец, 1997). Результаты исследований сопоставляли с данными нормального состава биотопа. При этом исходили из следующих критериев: 1) резкого (на несколько порядков) снижения численности основных для биотопа видов или вариантов; 2) значительного (на несколько порядков) увеличения численности популяций видов, которые в нормальном биоценозе встречаются в небольших количествах; 3) появления в м и кроф лоре большого количества атипичных штаммов основных видов. Для постановки диагноза достаточно было одного из перечисленных критериев, выявленного при анализе микробиоценоза. Диагноз кишечного дисбактериоза устанавливался в случае резкого снижения в испражнениях популяции бифидобактерий (106 КОВ/r и меньше), лактобакхерий (10s КОЕ/г и меньше), эшерихий (107КОЕ/г и меньше) при одновременном увеличении численности популяции одного или более условно-патогенных микробов: стафилококков, протея, клебсиелл и др. 104 КОЕ/г и больше, кандид 105 КОЕ/г и больше, а также эшерихий до 10% и более атипичных вариантов. 51 |
53 I II 111 IV 4. ЖСА Стафилококки 48 ч, аэробное, +37° С 5. 5% кровяной агар, Калины Стрептококки, энтерококки 48 ч, аэробное, +37иС 6. 5% кровяной агар Гемолитические штаммы 24 ч, аэробное, +37иС 7. ВильсонаБлера Анаэробы 2 сут, анаэробное, +371 ’С 8. Сабуро Дрожжеподобны е грибы 1-е сут, +37° С, 2-5 сут. +22° С, аэробное При изучении микробного пейзажа кишечника определяли как частоту высеваемости отдельных видов, так и их количественные показатели в пересчете на 1 г фекалий. Видовую идентификацию микроорганизмов проводили согласно определителя Берги (1980). Культуры, выросшие на питательных средах, подвергли групповой (анаэробные, не спорообразуюшие бактерии), родовой (лактобациллы, бифидобактерии, стрептококки, стафилококки) и видовой идентификации (стафилококки, эшерихии). Таксономическую принадлежность изолированных бактерий оценивали на основании изучения роста бактерий в аэробных и анаэробных условиях, отношения к окраске по Граму, характера роста на селективных средах, биохимической и серологической идентификации. Изучение энтеробактерий включало три этапа: первичную идентификацию, установление рода и идентификацию вида. Выращивание аэробов проводили на плотных дифференциальнодиагностических средах. Изолированный рост колоний достигался в результате посева 0,05 мл эмульсии испражнений из последних разведений. 55 Для регистрации роста спорообразующих анаэробных палочек производили посев на среду Вильсона-Блера из разведений 102105. Количество микроорганизмов подсчитывали по формуле: для плотных сред X = 20 •х •п •х •к для жидких сред X = 2 •х •к где X количество микроорганизмов каждого вида (КОЕ/г), п — количество выросших колоний, к разведи те, из которого произведен посев с обратным знаком степени. 2.2.8. Оценка кишечного микробиоценоза Оценку микробиоценоза проводили с использованием метода количественного выделения видов и вариантов микроорганизмов, входящих в состав микробиоценоза (И.Б.Куваева, 1991; В.В.Тец, 1997). Результаты исследований сопоставляли с данными нормального состава биотопа. При этом исходили из следующих критериев: 1) резкого (на несколько порядков) снижения численности основных для биотопа видов или вариантов; 2) значительного (на несколько порядков) увеличения численности популяций видов, которые в нормальном биоценозе встречаются в небольших количествах; 3) появления в микрофлоре большого количества атипичных штаммов основных видов. Для постановки диагноза достагочно было одного из перечисленных критериев, выявленного при анализе микробиоценоза. Диагноз кишечного дисбактериоза устанавливался в случае резкого снижения в испражнениях популяции бифидобактерий (106 КОЕ/г и меньше), лактобактерий (105 КОЕ/г и меньше), эшерихий (107 КОЕ/г и меньше) при одновременном увеличении численности популяции одного или более условно-патогенных микробов: стафилококков, протея, клебсиелл и др. 10'1 КОЕ/г и больше, кандид 105 КОЕ/г и больше, а также эшерихий до 10% и более атипичных вариантов. |