|
104КОЕ/г и больше, кавдид 10s КОЕ/г и больше, а также эшерихий до 10% и более атипичных вариантов. 2.1.2.3. Получение культур B.hominis Для получения клинических изолятов бластоцист фекалии собирали в чисто вымытые флаконы, не содержащие следов химических реактивов, дезинфицирующих веществ и антибиотиков. При доступе свободного кислорода бластоцисты гибнут в течение нескольких часов, поэтому материал для посева использовали сразу после его поступления. Пробы фекалий заливали равным объемом (1:1) физиологического раствора суспензировали и фильтровали через один слой марли. Фильтрат в объеме 0,5-1,0 мл вносили в пробирку с питательной средой, засевали одновременно 5-6 пробирок и культивирование проводили в течение трех суток, при температуре 37°С (Сахарова, 1997). 2.1.2.4. Метод обогащения культур B.hominis Для повышения эффективности обнаружения простейших фекалии, помсгцсшгые в консервант, концентрировали методом формалин эфирного осаждения но Ритчи в модификации Аллена Ридли (Сахарова, 1997). Для этого пипеткой 2-3 мл отстоявшейся суспензии переносили в центрифуж1гую пробирку, доливали 10% раствор формалина до 6 -7 мл, затем 2 -3 мл эфира. Далее пробирку закрывали резиновой пробкой, энергично встряхивали в течение 30 секунд и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2-3 минут. После этого надосадочную жидкость и фекальную пробку удаляли, оса/ток использовали для микроскопии. 2.1.2.5. Метод консервирования культур 3 грамма свежих фекалий помещали во флакон с консервирующей жидкостью в соотношении 1:3 и тщательно размешивали до получения гомогенной сус52 |
47 дицинской помопщ г.Ульяновска из фекалий детей в возрасте от 3 до 7 лет и взрослых в возрасте от 30 до 45 дет, находящихся на стационарном лечении с диагнозами: язвенная болезнь, хронический гастрит, хронический холецистит, хронический гепатит, неснецнфический язвенный колит, цирроз печени, желчно-каменная болезнь, синдром оперированного желудка и синдром раздраженной кишки. Исследования по выделению и первичной идентификации бластоцист из биологического материала проводили на базе клинической лаборатории городской больницы №1 г.Ульяновска (зав. лабораторией Т.И.Волгина ). Для получения клинических изолятов бластоцист фекалии собирали в чисто вымытые флаконы, не содержащие следов химических реактивов, дезинфицирующих веществ и антибиотиков. При доступе свободного кислорода бластоцисты гибнут в течение нескольких часов, поэтому материал для посева лучше использовать сразу после получения. Пробы фекалий заливали равным объемом (1:1) физиологического раствора, суспендировали и фильтровали через один слой марли. Фильтрат' в объеме 0,5-1,0 мл вносили в пробирку со средой Suresh (1993), засевали одновременно 5-6 пробирок и культивирование проводили при температуре 37°С (Т.В.Сахарова, 1997). Для культивирования простейших использовали среды Павловой, Циерта и Суреша. Среда Павловой содержит лошадиную сыворотку, однозамещенный фосфорнокислый калий и двузамещеииый фосфорнокислый натрий. Перед посевом в каждую пробирку' добавляют 1-2 петли мелкого стерильного рисового крахмала. В двухфазной яичной среде Циерта в качестве твердой фазы используют коагулированное в скошенном положении содержимое куриного яйца. Жидкая фаза представляет собой раствор Хснкса или Среду 199 с добавле 49 2.2.1.Метод консервирования 3 грамма свежих фекалий помещали во флакон с консервирующей жидкостью в соотношении 1:3 и тщательно размешивали до получения гомогенной суспензии. Затем полученную суспензию помещали во флакон и плотно его закрывали. В качестве консервирующей жидкости использовали консервант Турдыева, который включает 0,2% водный раствор азотистокислого натрия 80 мл., концентрированного формалина 10 мл., концентрированного раствора Люголя (4г. йодистого калия, 100мл. дистиллированной воды, 2г. кристаллического йода) 8 мл, глицерина 2мл (Д.Е.Генис, 1979). 2.2.2. Метод обогащения материала Для повышения эффективности обнаружения простейших фекалии, помещенные в консервант, концентрировали методом формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена Ридли (Т.В.Сахарова, 1997). Для этого пипеткой 2-3 мл. отстоявшейся суспензии переносили в центрифужную пробирку, доливали 10% раствор формалина до 6 -7 мл., затем 2 -3 мл. эфира. Далее пробирку закрывали резиновой пробкой, энергично встряхивали в течение 30 секунд и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 2-3 минут. После этого надосадочнуго жидкость и фекальную пробку' удаляли, осадок использовали для микроскопии. 2.2.3. Микроскопия препаратов Выявление бластоциет в препаратах проводили путем микроскопии нативных или окрашенных мазков, либо после формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли. Размеры бластоцист определяли при помощи окуляр микрометра. |