|
каждого штамма определяли величину LD50. В соответствии с получаемыми показателями к высоко вирулеитш.гм относили штаммы с LD50 от 101 до 103 КОЕ/мл, к умеренно вирулентным от Ю3до 106 КОЕ/мл, а штаммы с LD50 свыше iО6КОЕ/мл считали слабовирулентными (Коспокова и др., 1996). 2 .1 .2 .8. Метод экспериментального бластоцистоза Экспериментальный бластонистоз воспроизводили по методике К.Т.Мое (1997) в собственной модификации (приоритетная справка №2002114890 от 5.06.2002) на крысах-самцах, массой 220,3+25,6 г. С целью контроля на наличие бластоцисг у этих животных, их испражнения засевали на питательные среды. В в о д и м ы й крысам лнокулят готовили следующим образом. Из фекалий больного человека путем формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли готовили взвесь этих простейших (Сахарова, 1997). Затем полученную взвесь фильтровали через мембранный фильтр (Nucleopore) с диаметром пор 3 нм. С фильтров вакуоляршле формы бластоцисг смывали стерильным физраствором и хранили при температуре +4 °С. Перед заражением животных взвесь этих форм засевали на питательные среды и культивировали в течение трех суток при температуре 37°С с целью проверки жизнеспособности простейших. Для воспроизведения бластошгстоза животным вводили полученный инокулят per os с иомошыо градуированной пипетки, снабженной капиллярным наконечником. Концентрация простейших в стерильном физрастворе составляла 10'’ 107 кл/мл. Концентрацию вакуолярных форм в инокудяте подсчитывали в гемоцитометре. Животным контрольной группы вводили per os стерильную среду Suresh в таком же объеме (1 мл). 54 |
51 ш м 30-40 см от желудка. Перевязку остальной части тонкой кишки производили через каждые 10-12 см так, чтобы получилось не менее девяти изолированных сегментов, из которых четыре использовали для заражения, а остальные пять были контрольными (Ю.А.Барштейн и соавт., 1986). 2.2.6, Метод экспериментального бластоцистоза Воспроизведение экспериментального бластоцистоза было проведено на беспородных белых мышах, массой 20-25 гр. (К.Т.Мое, 1997). С целью контроля на наличие бластоцист испражнения этих экспериментальных живот ных засевали на питательную среду Сурсша. Вводимый животным инокулят готовили следующим образом. Из фекалий больного человека путем формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли готовили взвесь цист (Т.В.Сахарова, 1997). Затем взвесь фильтровали через мембранный фильтр (Nucleopore) с диаметром пор 3 нм. С фильтров цисты смывали стерильным физраствором и хранили при температуре 4°С. Перед заражением животных взвесь цист засевали на среду Сурсша и культивировали в течении трех суток при температуре 37°С с целью проверит жизнеспособности простейших. Для воспроизведения бластоцистоза м ы там вводили полученный инокулят per os с помощью градуированной пипетки, снабженной капиллярным наконечником. Концентрация цист в стерильном физрастворе составляла ПО4 2'106 цист/мл. Концентрацию цист в инокуляте подсчитывали в гемоцитометрс. Кроме инокулята, содержащего цисты для инфицирования животных использовали взвесь вакуолярных форм бластоцист в концентрации 1104 2 1 06 клеток/мл. |