|
гранул. Согласно данным литературы размеры этой формы варьируют от 6,5 до 20 мкм (Zierdt, 1983). В наших исследованиях диаметр клеток также составлял от 6 до 15 мкм (рис. 13). 73 Рис. 13. Гранулярная форма B.hominis Нами было замечено, что раствор Люголя окрашивает гранулярные формы более интенсивно, чем вакуолярные. На фоне светло-коричневой клетки гранулы обнаруживаются в виде темно-коричневых образований. Бласгоциегы амебоидной формы были обнаружены нами только в культуре (5,44%), причем при хранении культуры, количество амебоидных форм увеличивалось, что отмечено в работах Т.В.С'ахаровой (1997). Данное явление видимо, связано с изменяющимися свойствами питательной среды (изменение pH среды, окислительно-восстановительного потенциала и др.). Простейшие этой формы характеризовались наличием 1-2 псевдоподий, видимо участвующих в поступательном движении. Размеры клеток варьировали от 5 до16 мкм, каждые из них имели одно, два ядра. Однако нам не удалось обнаружить у амебоидных форм центрального тела, на наличие которых указывают H.Mac Cleur et al. (1998). |
88 И Зклетки с кол-вом ядер более 10 9 клетки с кол-вом ядер менее 10 Рис.9. Дифференциация бластоцист из культуры по количеству ядер При окраске по Романовскому-Гимзе ядра бластоцист приобретали насыщенный красный цвет, а цитоплазма голубой. Окрашивание раствором Люголя придавало цитоплазме легкий желтый оттенок, на фоне которого ядра имели более интенсивную окраску. Нередко в препаратах, приготовленных из культуры наблюдались формы делящихся простейших. Они имели овальную или гантелевидную форму. Микроскопия клинических изолятов почти не выявляла клегок в процессе деления. Второй формой бластоцист, встречающейся в препаратах из фекалий являлась гранулярная. В культуре эта форма бластоцист встречалась чаще (22,7%), чем в фекалиях (15,5%). Клетки имели сферическую форму и содержали большое количество гранул. Размер гранулярной формы бластоцист составлял от 4 до 10 мкм. Нами было замечено, что раствор Люголя окрашивает гранулярные формы более интенсивно, чем вакуолярные. На фоне светло-коричневой клетки гранулы обнаруживаются в виде темно-коричневых образований. 89 Амебоидная форма бластоцист встречалась только в препарагах (6,3%) из длительно хранящихся культур, что видимо связано с изменяющимися свойствами питательной среды (изменение pi I среды, окислительно-восстановительного потенциала и др.). Эта форма характеризуется наличием 1-2 псевдоподий, видимо участвующих в поступательном движении. Размеры клеток варьировали от 5 до 16 мкм, каждые из них имели одно, два ядра. Микроскопические исследования фекалии после формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли показали наличие цист. Они имели округлую форм}', размером 2-5 мкм. При окраске раствором Люголя цисты окрашивались в светло-коричневый цвет. Таким образом, изучение морфологических особенностей бластоцист выявило наличие в клиническом материале вакуолярной и гранулярной форм, а так же цист этих простейших, что согласуется с данными C.Zierdta et al, (1967), Т.В.Сахаровой (1997). В клиническом материале преобладали вакуолярные формы. На их долю приходилось 84,5%. Такие же результаты были получены Н.А.Чайкой (1992). Характерной особенностью вакуолярной формы бластоцист являлось наличие центрального тела, функции которого до настоящего времени обсуждаются. Нами установлено, что простейшие в которых центральное тело занимало более 90% всей клетки составили 24,73%; 70% 68,8% клетки и менее 70% 6,45% от общего количества вакуолярных форм, что подт верждается работами Mac Queen (1994). Отмечено большое количество многоядерных особей. Исследования показали преобладание фрагментированных ядер над плотными. Это хорошо было видно при окраске по Романовскому, что согласуется с данными Т.В.Сахаровой (1997). Выявлено полярное расположение ядер бласгоцист, что свидетельствует о синхронности протекающего в клетке процесса митоза. Аналогичные результаты получены у Mac Pherson D., Mac Queen W 90 (1994). В препаратах, также как Т.В.Сахарова (1997), мы наблюдали делящиеся бластоцисты, имеющие гантелевидную форму. Гранулярная форма бластоцист также обнаруживалась, как в фекалиях (15,5%), так и в культурах (22,7%), однако в препаратах, приготовленных из культуры эта форма встречалась чаще. Клетки имели сферическую форму, содержали большое количество гранул. Согласно данным литературы размеры этой формы варьируют от 6,5 до 25 мкм (C.Zierdt, 1983). В наших исследованиях диаметр клеток также составлял от 7 до 15 мкм. Амебоидные формы бластоцист нами обнаружены только в культуре (6,3%), причем при хранении культуры, количество амебоидных форм увеличивалось, что отмечено в работах Т.В.Сахаровой (1997). Однако нам не удалось обнаружить у амебоидных форм центрального тела, на наличие которых указывают H.M ac Cleur et al. (1998). 4.2. Культуральные свойства простейших B.hominis С целыо получения культур бластоцист C.Zierdt (1988) предложил двухфазную питательную среду, которую затем использовала в своей работе Л.М.Белова (1992) для получения культур бластоцист птиц (B.anatis, B.anseri, В. galli). Т.В.Сахарова (1997) для изучения бластоцист обезьян выращивала культуры простейших на среде Павловой. К.Т.Мое (1997) получал культуры бластоцист на среде Джонса. K.Suresh (1993) для культивирования бластоцист использовал три среды: ЕМ, СЕМ, ТЕМ. Учитывая большое количество имеющихся питательных сред мы провели исследования с целью выявления оптимальной питательной среды для культивирования B.hominis. Для этого произвели посевы клинических изолятов на все указанные питательные среды (табл. 16). |