53 2.2.1 Методика получения сыворотки и плазмы крови Сыворотку крови получали после ее свертывания, двухчасовой инкубации, ретракции сгустка и центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут. Кровь для получения плазмы получали в условиях силиконирования. Для этого иглы, пробирки и пипетки обрабатывались 5%-м раствором силикона ПМС500 в хлороформе и затем высушивались при 200 С° в течение 4 часов. Забор крови производили из локтевой вены. Кровь немедленно смешивали в пробирке с 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 и центрифугировали при 1500 об/мин (900g) в течение 10 минут при комнатной температуре. Для получения плазмы, бедной тромбоцитами, ее дополнительно центрифугировали при 4000 об/мин (1200g) в течение 20 минут. Исследование системы гемостаза проводилось с использованием ряда современных методик, направленных на диагностику ДВС-синдрома, оно включало определение следующих параметров: I. Методы исследования сосудисто-тромбоцитарного гемостаза: 1. Подсчет количества тромбоцитов в камере Горяева с использованием фазово-контрастной микроскопии по Brecher et al. (1953). 2. Спонтанная агрегация тромбоцитов. II. Общие коагуляционные тесты и методы, характеризующие образование протромбиназы и тромбина: 1. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) по Caen et al. (1968). 2. Аутокоагуляционный тест (АКТ) по Berkada et al.(1965) с дополнениями Л.З. Баркагана (1993). 3. Протромбиновое время по Quick (1935) III. Методы исследования конечного этапа свертывания: 1. Тромбиновое время свертывания по Biggs, Macfarlane (1962) 2. Содержание фибриногена в плазме по Р.А. Рутберг (1961). IV. Методы определения тромбинемии: 1 ' f i 1 4 1 * , i # % t « t ' V • « * ■ 1 |
И. Рентгенологические методы исследования: рентгеноскопия, рентгенография органов грудной клетки и брюшной полости, проводимая на аппарате Siemens Polystar ТОР, Мультисрезовая спиральная компьютерная томография органов брюшной полости и грудной клетки на аппарате General Electric Light Speed 16 Slice. III. Функциональные методы включали в себя электрокардиографию, ультразвуковое исследование поджелудочной железы, печени, почек, плевральной полости, сердца на аппарате Siemens Sonoline Versa Pro. IV. Эндоскопические методы исследования: лапароскопия, по показаниям проводили фиброгастродуоденоскопию и бронхофиброскопию фиброскопами фирмы «Olympus». V. Микробиологические исследования включали идентификацию вида патогенной микрофлоры в раневом отделяемом, перитонеальном и плевральном экссудатах и периферической крови. Помимо этих базовых методик, нами, с целью решения поставленных в работе задач, проводились специальные исследования по оценке состояния системы гемокоагуляции и фибринолиза. Все исследования проведены в лаборатории МУЗ «Городской больницы N 1» г. Барнаула (главный врач В.А. Пелеганчук). Методика получения сыворотки и плазмы крови. Сыворотку крови получали после ее свертывания, двухчасовой инкубации, ретракции сгустка и центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут [14]. Кровь для получения плазмы получали в условиях силиконирования. Для этого иглы, пробирки и пипетки обрабатывались 5%-м раствором силикона ПМС-500 в хлороформе и затем высушивались при 200°С в течение 4 46 часов. Забор крови производили из локтевой вены. Кровь немедленно смешивали в пробирке с 3,8% раствором нитрата натрия в соотношении 9:1 и центрифугировали при 1500 об/мин (900g) в течение 10 минут при комнатной температуре. Для получения плазмы, бедной тромбоцитами, ее дополнительно центрифугировали при 4000 об/мин (1200g) в течение 20 минут в соответствии с рекомендациями В.П. Балуды и соавт. [14]. Исследование системы гемостаза проводилось с использованием ряда современных методик, направленных на диагностику синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВСсиндром). Оно включало определение следующих параметров: I. Методы исследования сосудисто тромбоцитарного гемостаза: 1. Подсчет количества тромбоцитов в камере Горяева с использованием фазовоконтрастной микроскопии по Brecher et a.l. (1953); 2. Спонтанная агрегация тромбоцитов. II. Общие коагуляционные тесты и методы, характеризующие образование протромбиназы и тромбина: 1. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) по Caen et a.l. (1968), 2. Аутокоагуляционный тест (АКТ) по Berkada et а.1.(1965) с дополнениями Л.З. Баркагана (1993), 3. Протромбиновое время по Quick (1935); III. Методы исследования конечного этапа свертывания: 1. Тромбиновое время свертывания по Biggs, Macfarlane (1962), 2. Содержание фибриногена в плазме по Р.А. Рутберг (1961); 47 |