|
22 контроле и используются в более высоком разведении, чем конъюгаты гаммаглобулиновой фракции и фермента. Для достижения высокой специфичности, чувствительности, воспроизводимости, экспрессивности и автоматизации иммунохимических анализов принципиально возможным является использование только первой стадии простого иммунохимического взаимодействия. Так как процесс комплексообразован ия пары анализируемое соединение (антиген специфическое антитело) происходит в строго количественном соотношении, то экспериментально устанавливаемая концентрация метки, входящей в состав образующегося иммунохимического комплекса, однозначно связана с исходной концентрацией антигена. Для осуществления такого анализа необходимо провести эффективное разделение комплексов от свободных компонентов. Эту задачу оказалось легко решить, если один из компонентов пары антиген антитело прочно иммобилизовать на твердом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и осуществить физическое разделение образующихся иммунных комплексов от свободных компонентов. Возможносгь прочного связывания на носителе антител или антигенов с сохранением их способности к специфическому образованию иммунных комплексов и разработка на этом принципе твердофазных методов дали мощный импульс для развития иммуноферментных методов анализа. На протяжении 70-80-х годов иммуноферментные методы анализа интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное прикладное значение. Использование твердых носителей для сорбционной иммобилизации антител или антигенов с последующим специфическим связыванием анализируемого соединения на иммуносорбенте и выявлением образовавшихся иммунокомплексов с помощью меченых ферментами компонентов положило начало методам твердофазного иммуноферментного анализа [108]. |
11 антиферментные антитела. Антитела к пероксидазе в настоящее время производятся рядом фирм в коммерческом масштабе (НИИЭМ им. Гамалеи). Для достижения высокой специфичности, чувствительности, воспроизводимости, экспрессивности и автоматизации иммунохимических анализов принципиально возможным является использование только первой стадии простого иммунохимического взаимодействия. Так как процесс комплексообразования пары анализируемое соединение (антиген) специфическое антитело происходит в строго количественном соотношении, то экспериментально устанавливаемая концентрация метки, входящей в состав образующегося иммунохимического комплекса, однозначно связана с исходной концентрацией антигена. Для осуществления такого анализа необходимо провести эффективное разделение комплексов от свободных компонентов. Эту задачу оказалось легко решить, если один из компонентов пары антиген антитело прочно иммобилизовать на твердом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и осуществить физическое разделение образующихся иммунных комплексов от свободных компонентов. Возможность прочного связывания на носителе антител или антигенов с сохранением их способности к специфическому образованию иммунных комплексов и разработка на этом принципе твердофазных методов дали мощный импульс для развития иммуноферментных методов анализа. На протяжении 70-80-х годов иммуноферментные методы анализа интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное прикладное значение. Использование твердых носителей для сорбционной иммобилизации антител с последующим специфическим связыванием анализируемого соединения на иммуносорбенте я выявлением образовавшихся иммунокомплексов с помощью меченых 12 ферментами компонентов положило начало методам твердофазного иммуноферментного анализа (Engvall, Perlmann, 1971). Эти методы наиболее распространенные и используются для определения широкого круга, как низкомолекулярных соединений, так и высокомолекулярных соединений антител, гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, пестицидов. Особую значимость для широкого внедрения ИФА в практику имела разработка в качестве носителей для сорбционной иммобилизации антител и антигенов специальных полистирольных плат, содержащих 96 лунок. Факт сорбции антител на поверхности полистирола был установлен в середине 60-х годов и использован первоначально в методах радиоиммунологического анализа (РИА) (А.М. Егоров, с соавт., 1991). За разработку метода авторы Р. Йолоу и С. Берсон в 1977 году были удостоены Нобелевской премии; Радиоиммунный метод является самым чувствительным (на уровне пкг/мл). Однако ему присущи определенные недостатки: ограниченный срок жизни радиоактивной метки; наличия дорогостоящего оборудования; радиационная опасность для персонала (Т. Чард, 1981). В то время как ИФА имеет ряд преимуществ: высокая стабильность реагентов, невысокая стоимость анализа, отсутствие отходов загрязняющих окружающую среду и не опасен для здоровья экспериментатора (Carlies et al., 1981). Введение в практику ИФА полистироловых планшет позволило значительно увеличить число проводимых анализов и упростить методическую процедуру его выполнения. Были сконструированы специальные приборы, позволяющие автоматизировать постановку реакции и осуществлять одновременную регистрацию каталитической активности фермента метки в каждой из лунок полистиролового планшета. ИФА допускает и визуальную оценку результатов, а эта делает его доступным для обычных практических лабораторий. Эти достоинства позволили ИФА занять |