|
40 эпителиальными клетками как у экспериментально инфицированных индеек [149], так и у цыплят [170]. О подобных находках сообщалось также при использовании ИМ окрашивания для изучения инфекций респираторного тракта индеек [170] и цыплят [85,170]. Иммунохимические методы (ИФ и ИЛ) были применимы для демонстрации наличия МГ1В-специфического антигена в репродуктивном факте после экспериментальной инокуляции индеек-несушек [151] и кур-несушек [93]. Сывороточные антитела к МПВ птиц могут быть обнаружены непрямой иммунофлуоресценцией, вирусной нейтрализацией и ELISA [69,70]. Была использована непрямая иммунофлуоресценция с сывороткой от реконвалесцентов перед тем, как вирус мог быть изолирован на ГОК. Эта методика была весьма полезна в качестве первоначального скринингового теста [70]. Вирусная нейтрализация является трудоемким и требующим времени тестом. Ее использовали для сравнения штаммов в перекрестной реакции нейтрализации [68] или для исследования сывороток различных видов птиц, к которым не имелось антиглобулинов. В рутинной серологии проведение таких тестов было вытеснено методикой ELISA [87,117,125]. Реакция нейтрализации используется для диагностики МПВИ птиц, но гораздо реже, чем EL1SA, хотя было показано, что эти два метода обладают одинаковой чувствительностью [69]. Как правило, реакция серонейтрализации не применяется для мониторинга ответной реакции на вакцинацию. Реакцию нейтрализации выполняли во множестве систем, включающих ТОК [101], тканевую куль гуру ФЭК, клетки Vero [14,49,118,205,235] и клетки МА-104 [223]. Etcrradossi et al. [ПО] обратили внимание на важность выбора антигена для ELIS As. Неудовлетворительный антиген может способствовать получению ложно отрицательного диагноза или кажущейся неиммуногенности вакцины. Необходимо проведение большого объема работы по определению того, какие антитела обнаруживаются различными ELISA и можно ли разработать наборы способные обнаруживать антитела ко всем штаммам, или в качестве альтернативы, к различным подтипам. Необходимо помнить, что, несмотря на все |
29 (Baxter-Jones et al., 1986), так и на Bouins-фиксированных залитых в парафин тканях (Jones et al., 1986). Было показано, что специфическое окрашивание тесно связано с поверхностными ворсинчатыми эпителиальными клетками как у экспериментально инфицированных индеек (Jones et al., 1987), гак и у цыплят (Majo ct al., 1995). О подобных находках сообщалось также при использовании ИП окрашивания для изучения инфекций респираторного тракта индеек (Majo et al., 1995) и цыплят (Majo et al., 1995; Catelli et al., 1998). Иммунохимические методы (ИФ и ИП) были применимы для демонстрации наличия МПВ-специфического антигена в репродуктивном тракте после экспериментальной инокуляции индеек-несушек (Jones et al., 1988) и курнссушек (Cook et al., 2000). Сывороточные антитела к МПВ птиц могут быть обнаружены непрямой иммунофлуоресценцией, вирусной нейтрализацией и ELISA (Baxter-Jones ct al., 1986; 1989). Была использована непрямая иммунофлуоресценция с сывороткой от реконвалесцентов перед тем, как вирус мог быть изолирован на ТОК. Эта методика была весьма полезна в качестве первоначального скринингового теста (Baxter-Jones et al., 1986). Вирусная нейтрализация является трудоемким и требующим времени тестом. Ее использовали для сравнения штаммов в перекрестной реакции нейтрализации (Baxter-Jones ct al., 1987) или для исследования сывороток различных видов птиц, к которым нс имелось антиглобулинов. В рутинной серологии проведение таких тестов было вытеснено методикой ELISA (Grant et al., 1987; Chettle & Wyeth, l988;Gerrard etal., 1990). Реакция нейтрализации используется для диагностики МПВИ птиц, но гораздо реже, чем ELISA, хотя было показано, что эти два метода обладают одинаковой чувствительностью (Baxter-Jones et al., 1989). Как правило, реакция серонейтрализации не применяется для мониторинга ответной реакции на вакцинацию. Реакцию нейтрализации выполняли во множестве систем, включающих ТОК (Cook et al., 1993b), тканевую культуру ФЭК, 30 клетки Vero (Giraud et al., 1986; Redmann et ah, 1991; Williams et al., 1991) и клетки MA-104 (Toquin et al., 2000). Eterradossi et al. (1995) обратили внимание на важность выбора антигена для ELISAs. Неудовлетворительный антиген может способствовать получению ложно отрицательного диагноза или кажущейся неиммуногснности вакцины. Необходимо проведение большого объема работы по определению того, какие антитела обнаруживаются различными ELISA и можно ли разработать наборы способные обнаруживать антитела ко всем штаммам, или в качестве альтернативы, к различным подтипам. Необходимо помнить, что, несмотря на все удобства определения антител в ELISA, полученные результаты могут быть недостоверными показателями иммунитета. Но до тех пор, пока мы не будем иметь методик определения клеточно-опосредованного иммунитета, которые будут в равной степени просты для исполнения, мы будем доверять традиционным ELISA. В настоящее время доступно, по крайней мере, два различных типа коммерческих ELISA наборов. Первый тип использует планшеты с сорбированным неочищенным или очищенным вирусом. Тестируемую сыворотку вносят на планшет и позволяют реагентам взаимодействовать. Затем добавляют антиглобулии, специфичный для вида птицы и помеченный ферментом, и далее добавляют хромоген. Если в тестируемой сыворотке имеются специфические антитела, энзим-меченын антиглобулин будет фиксирован и его присутствие будет выявлено изменением окраски. Вторым типом является «блокирующий» вариант ELISA, посредством которого тестируемая сыворотка конкурирует с моноклональными антителами, полученными на мышах, за эпитоп вируса, сорбированного на планшете. Поэтому тестируемая сыворотка вносится на планшет, сорбированный вирусом, и ей дают время взаимодействовать. После промывания, таким же образом применяют МаЬ с последующим наслаиванием антимышиного глобулина, помеченного ферментом, а в конце добавляют хромоген. В этом |