|
47 2. 3. Собственные исследования Работа выполнена в 2010-2013 гг. в отделе вирусологии Государственного научного учреждения «Всероссийский научно исследовательский ветеринарный институт птицеводства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИВИП» Россельхозакадемии) в соответствии с научно-технической программой НИР 08.07.01.05. 2.3.1. Получение специфических компонентов для иммуноферментного анализа 2.3.1.1. Получение контрольного антигена метапневмовируса птиц. Метапневмовирус культивировали в клетках Vero в стационарных условиях при температуре ( 37,5 ± 0,5)° С в пробирках по 1,0 см3 или во флаконы PS “Orange Scientibic”. В течение 48 ч формировался плотный клеточный монослой, пригодный для инокуляции вирусом. Из сосудов сливали ростовую среду, монослой клеток дважды отмывали раствором Хенкса и вносили испытуемый вирус с множественностью заражения 0,1 и 1,0 ТЦД50 на клетку. Инфицированную культуру помещали в термостат для контакта вируса с клетками и выдерживали в течение 30-60 мин при температуре (37,5 ± 0,5)° С. Затем вносили поддерживающую среду. Результаты исследований показали, что вакцинный штамм VC-03 метапневмовируса птиц имел максимальное накопление 6,75 ±0,1 lg ТЦД50/СМ'' в клетках Vero с посевной концентрацией 200 тыс.кл/см3 при дозе вируса 1,0 ТЦДбо/кл. и времени съема через 72 часа. Инактивацию вируса проводили аминоэтилэтилениминов (АЭЭИ) в конечной концентрации 0,1% при температуре 37° С в течение 24 часов. По окончании инактивации проводили нейтрализацию осгаточного количества АЭЭИ путем добавления 2 М раствора тиосульфата натрия до конечной концентрации 0,03 М и охлаждали суспензию до температуры +4-8° С. |
36 иммуносупрессивным и какие из компонентов вируса наиболее значимы для разработки вакцины и ИФА технологии. Для быстрого обнаружения вируса необходимы улучшенные диагностические методики: кажется весьма вероятным, что они будут развиваться, главным образом, от ПЦР методологии, сделанные более легкими в использовании и выполненные непосредственно для идентификации подтипов вируса. Типоспецифические Mabs также могли быть использованы для непрямой иммунофлуоресценции в трахеальных или назальных соскобах или срезах. Заслуживают внимания исследования по ELlSAs (ИФА), поскольку эта методика способна выявлять антитела к одному или обоим полевым типам или к отдельным вакцинам и применяется для массовых серологических мониторинговых исследований. Изучение роли свободноживущих птиц в переносе инфекции помогло бы нам понять географическое распространение болезни. Поскольку метапневмовирус широко распространен в природе, контроль над заболеванием будет основан, главным образом, на вакцинации. Попрежнему будут использоваться традиционные живые аттенуированные или инактивированные вакцины, до тех пор, пока не будут разработаны их рекомбинантные аналоги. 2.Собствснные исследования Работа выполнена в 2006-2009 гг. в отделе вирусологии Государственного научного учреждения «Всероссийский научно исследовательский ветеринарный институт птицеводства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИВИП» Россельхозакадемии) в соответствии с научно-технической программой НИР 08.07.05. |